[发明专利]一种牛乳粉中鸡源掺加物的一重/双重PCR检测方法

权利要求书

1.一种牛乳粉中鸡源掺加物的一重/双重PCR检测方法，其特征在于，首先对待测产品的DNA模板进行提取，然后采用牛特异性引物和鸡特异性引物对提取的基因组DNA进行PCR扩增，同时对牛源DNA进行PCR扩增做为阴性对照组，对鸡源DNA进行PCR扩增做为阳性对照组，然后对所有扩增产物分别进行琼脂糖凝胶电泳分析；最后根据被测产品孔出现的电泳带与阳性对照组和阴性对照组进行比对，即可判定产品中是否添加了鸡源掺加物。

2.根据权利要求1所述的牛乳粉中鸡源掺加物的一重/双重PCR检测方法，其特征在于，牛特异性引物1和鸡特异性引物2具有的核苷酸序列为：

引物1-1 5′-CTAGAGGAGCCTGTTCTATAATCGATAA-3′；

引物1-2 5′-AAATAGGGTTAGATGCACTGAATCTAT-3′；

引物2-1 5′-AGCTAGAGAGAGGGGACACCCT-3′；

引物2-2 5′-GGATTAGAGGGATTCCTAGT-3′。

3.根据权利要求1所述的牛乳粉中鸡源掺加物的一重/双重PCR检测方法，其特征在于，PCR反应所用试剂还包括Taq酶、dNTP、10×缓冲液、MgCl₂和灭菌水。

4.根据权利要求1-3任意一项所述的牛乳粉中鸡源掺加物的一重/双重PCR检测方法，其特征在于，所述的PCR引物浓度为0.1-0.4μmol/L。

5.根据权利要求4所述的牛乳粉中鸡源掺加物的一重/双重PCR检测方法，其特征在于，所述的PCR引物浓度为0.2μmol/L。

6.根据权利要求1-3任意一项所述的牛乳粉中鸡源掺加物的一重/双重PCR检测方法，其特征在于，所述PCR反应循环条件为预变性92～96℃3～8min；变性92～96℃20～40s，退火52～60℃20～40s，延伸72℃30～120s，共35个循环，最后延伸72℃3～10min。

7.根据权利要求6所述的牛乳粉中鸡源掺加物的一重/双重PCR检测方法，其特征在于，所述PCR反应循环条件为预变性94℃4min；变性94℃30s，退火54℃30s，延伸72℃60s，共35个循环，最后延伸72℃7min。

8.根据权利要求1-3任意一项所述的牛乳粉中鸡源掺加物的一重/双重PCR检测方法，其特征在于，进行琼脂糖凝胶电泳分析采用的琼脂糖凝胶的质量浓度为1.5～2.0％。

9.根据权利要求8所述的牛乳粉中鸡源掺加物的一重/双重PCR检测方法，其特征在于，进行琼脂糖凝胶电泳分析采用的琼脂糖凝胶的质量浓度为1.7％。