[发明专利]羊胎素多肽及其制备方法

权利要求书

1.羊胎素多肽的制备方法，其特征在于该方法包括以下的步骤:

1）羊胚胎及羊胎盘原料前处理：取羊胚胎及羊胎盘为原料，清洗，去除杂质，0～5℃低温下粉碎成粗粉；

2）羊胚胎及羊胎盘超微粉碎、细胞破壁：将羊胚胎及羊胎盘粗粉低温-40℃～-50℃冷冻1～3h后，-30～-10℃超微粉碎，细胞破壁，达到0.1～10μm粒度；

3）羊胚胎及羊胎盘的提取和酶解：细胞破壁后的羊胚胎及羊胎盘浆液加3～10倍蒸馏水温浸提取后过滤得滤液A和沉淀A，沉淀A采用蛋白酶酶解后抽滤得水解液B，合并滤液A和水解液B，得羊胚胎及羊胎盘素的精制羊胎素；

4）采用葡聚糖凝胶层析法，根据分子量大小对上述步骤3）中得到的羊胎及羊胎盘素原液进行以下的分级精制：

①分离氨基酸，分子量<700的多肽：羊胚胎及羊胎盘素的精制羊胎素上样，固定相Sephadex G-10，依次用水，2%NaCl溶液洗脱，收集不同组分；

②分离分子量1000-5000的多肽：①中水洗脱液上样，固定相Sephadex G-25，依次用水，0%-2%NaCl溶液梯度洗脱，收集不同组分；

③分离分子量5000-30000的多肽：②中水洗脱液上样，固定相Sephadex G-50，依次用水，0%-2%NaCl溶液梯度洗脱，收集不同组分。

2.根据权利要求1所述的羊胎素多肽的制备方法，其特征在于：步骤1）中以2～3个月龄的羊胚胎及羊胎盘为原料。

3.根据权利要求1所述的羊胎素多肽的制备方法，其特征在于：步骤3）中蛋白酶采用木瓜蛋白酶与胰蛋白酶中一种或两种混合。

4.根据权利要求1所述的羊胎素多肽的制备方法，其特征在于：步骤3）中蛋白酶的使用量为沉淀A重量的0.1%～2%。

5.根据权利要求4所述的羊胎素多肽的制备方法，其特征在于：步骤3）中蛋白酶的使用量为沉淀A重量的0.3%～1%。

6.根据权利要求1或2或3或4或5所述的羊胎素多肽的制备方法，其特征在于：步骤3）中蛋白酶采用木瓜蛋白酶与胰蛋白酶两种混合，酶解反应的温度为40～50℃，pH为7.0～8.0，木瓜蛋白酶与胰蛋白酶的酶配比1：0.5～2。

7.根据权利要求6所述的羊胎素多肽的制备方法，其特征在于：步骤3）中酶解反应的温度为45℃，pH为7.5，木瓜蛋白酶与胰蛋白酶的酶配比1：1。

8.根据权利要求1或2或3或4或5所述的方法制备得到的羊胎素多肽。

9.根据权利要求6所述的方法制备得到的羊胎素多肽。