[发明专利]一种产蛋白酶的寡营养细菌分离筛选方法无效
| 申请号： | 201110194092.8 | 申请日： | 2011-07-12 |
| 公开（公告）号： | CN102268392A | 公开（公告）日： | 2011-12-07 |
| 发明（设计）人： | 程争鸣;张元明;牟书勇;齐晓玲;吴楠;潘惠霞 | 申请（专利权）人： | 中国科学院新疆生态与地理研究所 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12R1/01 |
| 代理公司： | 乌鲁木齐中科新兴专利事务所 65106 | 代理人： | 张莉 |
| 地址： | 830011 新疆维吾尔*** | 国省代码： | 新疆;65 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 蛋白酶 营养 细菌 分离 筛选 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种产蛋白酶的寡营养细菌分离筛选方法，其特征在于按下列步骤进行：
a、采样：取新疆古尔班通古特沙漠0-5cm处土壤样品装入采样袋备用；
b、菌株的分离：采用平板稀释分离法，将样品涂布于无机氮培养平板，温度37℃培养48小时，获得单个菌落后，再通过划线法纯化获取纯菌株，其中无机氮培养基为(NH4)2SO4 0.5，KH2PO4 1g，MgSO40.2g，NaCl 5g，CaCO3 5g，葡萄糖用量为每升培养基中含碳量为15mg，琼脂粉11g，蒸馏水1000ml，pH 7.0-7.2；
c、初筛：将步骤b分离获得的纯菌株通过穿刺的方式接种于明胶培养基上，温度37℃培养48小时，选取液化明胶能力强的菌株，其中明胶培养基为：牛肉膏3g，蛋白胨5g，明胶120g，蒸馏水1000ml，pH7.0-7.2；
d、复筛：将步骤c初筛获得的菌株，接种于豆饼粉液体培养基中，培养基装液量35mL/250mL三角瓶，温度37℃摇瓶振荡培养48小时，摇瓶转速200r/min，以酪蛋白为底物测酶活后筛选酶活力高的菌株即可，其中豆饼粉培养基为玉米粉20g，豆饼粉15g，麸皮20g，Na2HPO4 0.3g，NaH2PO4 0.2g，MgSO4 0.2g，CaCl2 0.2g，蒸馏水1000ml，pH 7-7.2。
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