[发明专利]一种提高牛腔前卵泡体外发育的培养基及其应用

权利要求书

1.一种制备促进离体哺乳动物腔前卵泡体外发育的培养基的方法，为将胰岛素、转铁蛋白、亚硒酸钠、丙酮酸钠、谷氨酰胺、次黄嘌呤、血清、促卵泡素、促黄体素、雌激素、PTEN抑制剂、水和α-MEM培养基混合，得到培养基，所述胰岛素在所述培养基中的浓度为5ug/ml，所述转铁蛋白在所述培养基中的浓度为5ug/ml，所述亚硒酸钠在所述培养基中的浓度为5ng/ml；所述丙酮酸钠在所述培养基中的浓度为(0.21-0.29)mmol/l，所述谷氨酰胺在所述培养基中的浓度为(1.5-2.0)mmol/l，所述次黄嘌呤在所述培养基中的浓度为(1.8-2.5)mmol/l，所述血清在所述培养基中的浓度为5％-10％(体积百分含量)，所述促卵泡素在所述培养基中的浓度为0.25μg·ml^-1-0.5μg·ml^-1，所述促黄体素在所述培养基中的浓度为5IU ml^-1-10IUml^-1，所述雌激素在所述培养基中的浓度为0.5μg·ml^-1-1.0μg·ml^-1，所述PTEN抑制剂在所述培养基中的浓度为100nmol/L-10μmol/L，所述α-MEM培养基在所述培养基中的浓度为10.1g/L。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述丙酮酸钠在所述培养基中的浓度为0.21mmol/l、0.23mmol/l或0.29mmol/l；所述谷氨酰胺在所述培养基中的浓度为1.5mmol/l、1.8mmol/l或2.0mmol/l，所述次黄嘌呤在所述培养基中的浓度为1.8mmol/l、2mmol/l或2.5mmol/l，所述血清在所述培养基中的浓度为5％、7.5％或10％(体积百分含量)，所述促卵泡素在所述培养基中的浓度为0.25μg·ml^-1、0.4μg·ml^-1或0.5μg·ml^-1，所述促黄体素在所述培养基中的浓度为5IU ml^-1、8IU ml^-1或10IU ml^-1，所述雌激素在所述培养基中的浓度为0.5μg·ml^-1、0.8μg·ml^-1或1.0μg·ml^-1，所述PTEN抑制剂在所述培养基中的浓度为100nmol/L、1μmol/L或10μmol/L。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：

所述血清为胎牛血清；

所述雌激素为雌激素E2；

所述PTEN抑制剂为PTEN抑制剂pic。

4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：所述哺乳动物为牛。

5.权利要求1-4中任一所述的方法制备的培养基。

6.权利要求5所述的培养基在促进离体哺乳动物腔前卵泡体外发育中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述哺乳动物为牛。

8.根据权利要求6或7所述的应用，其特征在于：

所述离体哺乳动物腔前卵泡体外发育通过增加卵泡直径和/或提高卵泡成腔率体现。

9.一种体外培养获得有腔卵泡的方法，包括如下步骤：将离体哺乳动物腔前卵泡在权利要求5所述的培养基中培养，得到有腔卵泡。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：

所述培养的温度为39℃，所述培养在5％CO₂条件下进行，所述培养的时间为21天。