[发明专利]STR分型标准物质

说明书

技术领域

本发明涉及法医DNA检验分析领域中一种STR分型标准物质。

背景技术

短串联重复序列(short tandem repeat，STR)又称为简单重复序列(simple sequence repeats，SSRs)，是人类基因组中分布较为广泛的一类遗传标记，其核心序列一般由2～6个碱基组成，核心序列的重复单位数目不同导致同一基因座中存在不同的等位基因。STR序列绝大多数分布于基因组非编码区，核心重复序列呈串联排列，扩增片段一般在400bp以下，目前在法医个人识别及亲子鉴定中得到了广泛应用。

随着法医DNA检验分析技术的发展，其检验技术经历了限制性片段长度多态性(RFLP)、短串联重复序列(STR)和单核苷酸多态性(SNP)等三个主要阶段。与此同时，检验过程中所用到的法医DNA标准物质也在不断发展。法医DNA标准物质不仅可以用来进行仪器的检验和校准、评价DNA检验结果的准确性和有效性、研究新的DNA检验方法，而且在实验室认可以及实验技术人员的培训及能力考核中也发挥着重要作用。

美国国家标准与技术研究所(National Institute of Standards and Technology，NIST)作为美国的商业部门，负责开发国家及国际标准物质。在NIST提供的标准物质中，有多种标准物质用于法医DNA的分型检测。NIST在1992年即推出了基于RFLP分型技术的SRM2390，以后随着检验技术的发展，NIST又于1995年推出了基于VNTR分型的SRM2391。自此以后，法医DNA检验技术的发展突飞猛进，尤其是STR基因座广泛应用于个体识别中，能够实现数字化记录检验结果，检验灵敏度大大提高。另外结合利用用复合扩增技术对基因座进行扩增，大大节省了实验时间，提高了个体识别率，因而STR技术迅速取代原来的VNTR技术，成为法医DNA检验中最重要的技术手段。与此同时，针对STR技术的法医DNA标准物质也成为研究重点，原来的SRM2391只有四个STR(TH01，F13A01，vWA和FES/FPS)基因座的信息，这远远不能满足法医DNA检中对STR基因座的信息要求，法医DNA检验要求SRM2391应包括所提供的全部DNA样本的STR信息，这些STR信息至少应包括FBI实验室CODIS中的13个核心基因座。

1998年6月NIST对SRM2391各个组分的25个基因座分型信息重新进行了分型检测，基因座包括FBI实验室CODIS中的13个核心基因座以及其它8个STR基因座，分别为CSF1PO、D2S1338、D3S1358、D5S818、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D19S433、D21S11、F13A01、F13B、FES/FPS、FGA、LPL、Penta D、Penta E、TH01、TPOX、vWA、HLA-DQA1、PolyMarker、D1S80和Amelogenin基因座。经过分型检测之后，NIST发布了SRM2391的STR基因分型值，新推出了针对STR检测的DNA标准物质SRM2391b，SRM2391b包括SRM2391的细胞组分和基因组DNA组分，而去除了扩增产物、D1S80等位基因分型混合物和DNA Marker。只含有点样于直径6mm滤纸上的9947A和9948细胞，以及分别从9947A和9948两种细胞系和其它八个个体所提取的基因组DNA。

目前在STR分型检验过程中，SRM2391b使用最为频繁。在日常法医DNA检验过程中，一般使用9947A或9948的基因组DNA作为阳性对照来进行质量控制，每次扩增检测结果可以首先参考阳性对照检测结果，以此判断检测过程和结果分析是否准确可靠。在实验室认可以及实验室技术人员能力考核过程中也大量使用该标准物质中的组分进行操作考核，这些应用使SRM2391b成为目前最为常用的法医DNA检验标准物质之一。