[发明专利]无创伤一步法胃幽门螺旋杆菌检测试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种胃幽门螺旋杆菌检测试剂盒以及利用该试剂盒来无创伤一步地对胃幽门螺旋杆菌进行检测的方法。

背景技术

从近年来对HP（胃幽门螺旋杆菌）感染的大量研究中提出了许多HP致胃癌的可能机制：①细菌的代谢产物直接转化黏膜；②类同于病毒的致病机制，HP的DNA的某些片段转移入宿主细胞，引起转化；③HP引起炎症反应，其本身具有基因毒性作用。在这些机制中，广泛认为第三个机制可能是引起疾病的最直接致病机制。

临床上对于HP感染的患者，HP根除治疗是非常必要的。世界卫生组织/国际癌症研究机构(WHO/IARC) 现已将幽门螺旋杆菌定为Ⅰ类致癌原。因此临床上对于有HP感染的患上消化道疾病的患者常规HP 根除治疗是非常必要的。

流行病学研究表明幽门螺旋杆菌感染了世界一半以上的人口，其发病率在各个国家或地区不同，甚至同一个国家的各个地区也不尽相同。目前已知发病率的高低与社会经济水平、人口密集程度、公共卫生条件以及水源供应均有较密切的关系。也有报道指出，HP感染有明显的季节性分布特征，以7～8月份为高峰。我国及大多数发展中国家人群HP感染因地区有所不同，低至20％，高达90％，人群中总感染率高于发达国家。因此早期诊断对HP的临床诊断及指导临床治疗具有重要的意义。

目前医院采用的实验室诊断方法有：胃镜取活检标本检查、酶检查、尿素酶检查、15N-尿素试验、免疫学检测、酶联免疫吸附试验、聚合酶链反应（PCR试验）等。但是，这些方法检测都一定程度上存在不足。

胃镜取活检标本检查是指通过胃镜检查钳取胃黏膜(多为胃窦黏膜)作直接涂片、染色，组织切片染色及细菌培养来检测HP。其中胃黏膜细菌培养是诊断HP最可靠的方法，可作为验证其他诊断性试验的“金标准”，同时又能进行药敏试验，指导临床选用药物。但本方法要进行胃镜检查，给患者带来痛苦，致使有些患者不能忍受而拒绝检查。另外有些患者不适合行胃镜检查，如心脏病患者、年老体弱者等。同时胃镜检查可能存在胃穿孔、胃出血甚至心跳骤停等并发症。

15N-尿素试验是用15N标记的尿素供患者口服，然后收集2h尿检出其15N－尿氨的排出率，以判断胃内HP感染程度，能反映胃内整体感染情况，可避免活检时由于感染灶分布不均而造成的偏差。这一试验具有13CO2呼气试验同样的优点，它是无损伤性的，不需作胃镜，亦无放射性损伤；它的敏感性特异性高，是定量的，且是反映整个胃的感染情况，克服了活检标本采样有损伤性和分布不均的缺点，采样比呼气试验方便，测定的准确性较高，缺点与13C－呼气试验相同，检测需用质谱仪，检测费用较高。由于15N－尿氨排出试验是一种尿素在胃内分解后，15N经吸收通过肾脏由尿排出的试验，因此有严重肝肾功能损害者不宜使用。

酶联免疫吸附试验是采用酶标免疫分析法测定标本中IgG水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入HP抗原、生物素化的抗人HP IgG抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的HP IgG呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。试剂盒保存温度为-20℃，当频繁使用时，可放置在2-8℃，对保存温度要求苛刻，不充分的洗涤易造成假阳性，所以对操作人员要求高。操作时间约4.5小时，时间较长，步骤繁琐。

聚合酶链反应（PCR试验）是一种体外扩增特异性DNA片段的方法。PCR方法检测幽门螺旋杆菌的特异性较高，近年来随着分子生物学技术的迅速发展，特别是聚合酶链反应(PCR)技术的应用，能特异地检出活检组织中的HP，该技术是基于天然DNA复制的原理而设计的一种体外DNA扩增方法。该测定方法最大特点是特异性强和灵敏度高。目前应用PCR检测HP的扩增物有以下两类：①扩增HP尿素酶基因某个片段；②扩增HP16Sr RNA基因片段。随着PCR技术日臻完善，其应用前景为：作为非侵入性方法，诊断HP感染；作为流行病学调查工具，确定细菌感染的来源及传播途径； 研究HP遗传学特性，进行细菌致病因子基因的分裂、克隆，然后确定与HP 毒素决定因子表达有关的基因，如尿素酶基因、细胞毒素基因和粘着素基因，有助于更深入地了解HP的致病机。但是，PCR试验在操作时，尤其要避免外界污染和残留污染，以免发生假阳性，并且被核酸污染的气溶胶较难清除。PCR试验的开展需要较高的实验条件，对实验人员和试验设备要求较高。