[发明专利]一种检测奶粉中β-内酰胺类抗生素的前处理方法及使用其的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于抗生素检测的前处理方法及使用其的检测方法，特别适用于检测奶粉中的β-内酰胺类抗生素。

背景技术

目前国内外关于奶粉中抗生素的检测方法主要包括液相色谱-质谱法、质谱法和微生物抑制法。微生物抑制法检测抗生素时，常用利普斯50试剂盒（ECLIPSE50）和戴尔沃SP-NT试剂盒（Delvotest SP-NT）进行抗生素检测。其优点能够快速检测且不依赖昂贵的检测仪器。使用微生物试剂盒检测奶粉抗生素时，需先向奶粉样本中加水，将其稀释成复原乳，再用试剂盒检测。利用前述方法使用利普斯50试剂盒检测奶粉中青霉素的检出限为24-32μg/kg，利用前述方法使用戴尔沃SP-NT试剂盒检测奶粉中青霉素的检出限为16-24μg/kg。检出限较高，不适用于对灵敏度要求更高的检测。并且由于其样本前处理过程中保留了奶粉中存在的所有抗生素，无法单独检测其中β-内酰胺类抗生素的含量。

在国家标准GB-T 21315-2007 《动物源性食品中青霉素族抗生素残留量检测方法》及GB-T 22975-2008 《牛奶和奶粉中阿莫西林、氨苄西林、哌拉西林、青霉素G、青霉素V、苯唑西林、氯唑西林、萘夫西林和双氯西林残留量的测定》中，均提到用液相色谱-质谱或质谱法检测牛奶或奶粉中β-内酰胺类抗生素的方法。检测前牛奶或奶粉的前处理方法均包括沉淀蛋白和固相萃取过程，用以提取和净化样本中的β-内酰胺类抗生素，GB-T 21315-2007中的前处理方法还可以对样本中的β-内酰胺类抗生素起到浓缩作用，但经前处理后的样本用于抗生素的微生物试剂盒检测时，空白样本显示阳性，检测结果无意义。

发明内容

本发明的目的是发明一种奶粉的前处理方法，待测奶粉经过这种方法进行前处理后可使其中含有的β-内酰胺类抗生素得到有效的净化和浓缩，适用于β-内酰胺类抗生素的微生物试剂盒检测。

本发明的另一目的是发明一种奶粉中β-内酰胺类抗生素的检测方法，先对待测奶粉进行前处理，再用微生物试剂盒进行检测。这种检测方法与传统微生物试剂盒检测方法相比，能够单独检测奶粉中β-内酰胺类抗生素，且具有较高的灵敏度。

本发明提供了一种检测奶粉中β-内酰胺类抗生素的前处理方法，包括如下步骤：向待测奶粉中加水并混匀，用乙腈-水溶液提取后，旋转蒸发去除乙腈，得到无乙腈上清液；在无乙腈上清液中加入磷酸盐缓冲液，混匀后过HLB固相萃取柱净化，得到洗脱液；用氮气吹干洗脱液，得到沉淀物；将处理每克待测奶粉产生的沉淀物溶解在0.5或1mL无抗生素液态奶中，制得待测奶粉的待检测液。

在前处理方法的一种示意性实施方式中，其中，乙腈-水溶液中乙腈与水的体积比为3：1。

在前处理方法的一种示意性实施方式中，其中，提取的过程中，离心转速为5000r/min，离心时间为8min。

本发明还提供了一种奶粉中β-内酰胺类抗生素的检测方法，包括如下步骤：向待测奶粉中加水并混匀，用乙腈-水溶液提取后，旋转蒸发去除乙腈，得到无乙腈上清液；在无乙腈上清液中加入磷酸盐缓冲液，混匀后过HLB固相萃取柱净化，得到洗脱液；用氮气吹干洗脱液，得到沉淀物；将处理每克待测奶粉产生的沉淀物溶解在0.5mL无抗生素液态奶中，制待测奶粉的待检测液；以及用利普斯50试剂盒对待检测液进行检测。

本发明又提供了一种奶粉中β-内酰胺类抗生素的检测方法，包括如下步骤：向待测奶粉中加水并混匀，用乙腈-水溶液提取后，旋转蒸发去除乙腈，得到无乙腈上清液；在无乙腈上清液中加入磷酸盐缓冲液，混匀后过HLB固相萃取柱净化，得到洗脱液；用氮气吹干洗脱液，得到沉淀物；将处理每克待测奶粉产生的沉淀物溶解在1mL无抗生素液态奶中，制得待测奶粉的待检测液；和用戴尔沃SP-NT试剂盒对待检测液进行检测。

本发明的检测奶粉中β-内酰胺类抗生素的前处理方法中，待测奶粉通过沉淀蛋白、固相萃取、氮气吹干及无抗生素液态奶回溶的过程，不仅达到了净化和浓缩的效果，且其最终溶解于无抗生素液态奶，适宜于β-内酰胺类抗生素的微生物试剂盒检测，避免了假阳性结果。并且有效降低了用微生物试剂盒检测奶粉中β-内酰胺类抗生素的检出限。

本发明的奶粉中β-内酰胺类抗生素的检测方法通过对奶粉样本进行特定的前处理，降低使用微生物试剂盒检测奶粉中β-内酰胺类抗生素的检出限，使其达到更高的灵敏度，适应快速并且灵敏度较高的奶粉工业化检测。

具体实施方式

为了对发明的技术特征、目的和效果有更加清楚的理解，现结合各实施例具体说明本发明。