[发明专利]一种胞壁结合型生物破乳剂的提取方法

说明书

技术领域

本发明属于工业微生物技术领域，涉及一种胞壁结合型生物破乳剂的提取方法。

背景技术

生物破乳剂是生物表面活性剂的一种，是一类能够使乳状液油水分离的新型破乳剂。与传统化学破乳剂相比，生物破乳剂具有高效低毒、可生物降解、在极端条件下发挥活性等优点，在原油开采、含油土壤修复等领域具有较大的应用前景。(Cairns，W.L.，Cooper，D.G.，Zajic，J.E.，Wood，J.M.，Kosaric，N.，1982.Characterization of Nocardia amarae as a Potent Biological Coalescing Agent of Water-Oil Emulsions.Appl.Environ.Microbiol.，43，362-366.)

目前发现的生物破乳剂多紧密结合于破乳菌株表面，难于提取因而不利于破乳活性物质的性质研究。因此，针对产胞壁结合型生物破乳剂的菌株，需要简捷、方便、高效的提取手段来得到其破乳活性物质，以便于对其进行纯化鉴定，进一步揭示生物破乳菌破乳机理，从而指导生物破乳菌的培养和大规模工业化应用。

目前大量应用于提取微生物胞壁结合物的方法是有机溶剂提取(Franzetti，A.，Bestetti，G.，Caredda，P.，La Colla，P.，Tamburini，E.，2008.Surface-active compounds and their role in the access to hydrocarbons in Gordonia strains.FEMS Microbiol.Ecol.，63，238-248.)，另外水提取法被广泛应用于植物提取(Geuenich，S.，Goffinet，C.，Venzke，S.，Nolkemper，S.，Baumann，I.，Plinkert，P.，Reichling，J.，Keppler，O.，2008.Aqueous extracts from peppermint，sage and lemon balm leaves display potent anti-HIV-1 activity by increasing the virion density.Retrovirology，5，27.)，该法也可以借鉴用于微生物胞壁物质提取。但是这些方法应用于产胞壁结合型生物破乳剂的破乳菌时，普遍存在提取过程复杂、效率不高、提取产物破乳活性不好、提取不完全等问题。

发明内容

针对现有技术中提取效率低，提取不完全，提取产物破乳活性不好等问题，本发明的目的是提供一种胞壁结合型生物破乳剂的提取方法，该方法工艺简单、提取效率高，且能较大程度上保留提取物的功能活性。

本发明的技术方案如下：

本发明提供了一种胞壁结合型生物破乳剂的提取方法，该方法包括以下步骤：将产胞壁结合型生物破乳剂的破乳菌菌体干粉与碱液混合搅拌，经离心、中和、浓缩、透析除盐和冷冻干燥，得到胞壁结合型生物破乳剂。

所述的产胞壁结合型生物破乳剂的破乳菌选自产碱杆菌(Alcaligenes sp.)、诺卡氏菌(Nocardia sp.)、棒状杆菌(Corynebacterium sp.)、红球菌(Rhodococcus sp.)或微球菌(Micrococcus sp.)等菌种。

所述的产胞壁结合型生物破乳剂的破乳菌菌体干粉和碱液的料液比为5∶1～25∶1g/L。

所述的碱液是浓度为0.05-0.15mol/L的NaOH溶液。

所述的搅拌是在温度为25-45℃，转速为500-1000rpm的条件下，水浴磁力搅拌2-12h。

所述的离心其转速为10000-12000rpm，温度4-15℃，时间10-20min。

所述的中和是用6mol/L盐酸将离心后上清液pH值调至6.8-72。

所述的浓缩是在温度45-55℃的条件下，将中和后清液减压旋转蒸发至5-15mL。

所述的透析除盐包括以下步骤：将浓缩后液体使用100Da透析袋浸泡在蒸馏水中脱盐，涨袋后用聚乙二醇(PEG12000)浓缩脱水，如此反复，直至透析袋外部蒸馏水的盐度＜10mg/L。

所述的冷冻干燥是在-50℃下冷冻干燥24h。

本发明同现有技术相比，具有以下优点和有益效果：

1.本发明相对于其它提取方法，微生物破乳活性物质的提取率较高，提取率最高可达40％以上。