[发明专利]家蝇抗药性检测试剂盒及其专用引物

权利要求书

1.一种检测家蝇中kdr基因突变位点的引物，由引物组A和引物组B组成：

所述引物组A包括引物2和引物3，所述引物2和所述引物3的核苷酸序列分别为序列表中序列2和序列表中序列3；

所述引物组B包括引物2和引物4，所述引物2和所述引物4的核苷酸序列分别为序列表中序列2和序列表中序列4。

2.根据权利要求1所述的引物，其特征在于：

所述引物组A还包括引物1，所述引物组B还包括引物1，所述引物1的核苷酸序列为序列表中序列1。

3.根据权利要求1或2所述的引物，其特征在于：

所述引物组A和所述引物组B为独立包装；

所述引物组A中所述引物1、引物2和引物3的质量比为1∶2∶1；

所述引物组B中所述引物1、引物2和引物4的质量比为1∶2∶1；

所述突变位点为L1014F。

4.一种检测家蝇中kdr基因突变位点的PCR试剂，由试剂A和试剂B组成；

所述试剂A由所述引物组A和PCR缓冲液组成；

所述试剂B由所述引物组B和PCR缓冲液组成；

所述各引物组中各引物在对应的所述PCR试剂中的浓度均为0.4uM；

所述突变位点为L1014F。

5.一种制备检测家蝇中kdr基因突变位点的试剂的方法，包括如下步骤：

1)分别将权利要求1-3中任一所述的引物中的所述引物组A和所述引物组B进行独立包装，得到独立包装引物组A和独立包装引物组B；

2)再将步骤1)得到的独立包装引物组A和步骤1)得到的独立包装引物组B进行包装，得到试剂；

所述突变位点为L1014F。

6.由权利要求5所述方法制备得到的试剂。

7.一种检测家蝇中kdr基因突变位点的试剂盒，为如下1)或2)：

1)所示的试剂盒由试剂盒A和试剂盒B组成；

所述试剂盒A为含有权利要求4所述PCR试剂中的试剂A的试剂盒；

所述试剂盒B为含有权利要求4所述PCR试剂中的试剂B的试剂盒；

2)所示的试剂盒为含有权利要求6所述的试剂的试剂盒；

所述突变位点为L1014F。

8.权利要求1-3中任一所述引物或权利要求4或6所述试剂或权利要求7所述试剂盒在检测家蝇中kdr基因突变位点、检测家蝇抗药性或制备检测家蝇抗药性产品中的应用；所述突变位点为L1014F，所述抗药性为抗菊酯类药物；所述菊酯类药物具体为溴氰菊酯、Es-生物丙烯菊酯、氯菊酯或高效氯氰菊酯。

9.一种检测待测家蝇中kdr基因突变位点的方法，包括如下步骤：

用权利要求1-3中任一所述的引物或权利要求4或6所述试剂或权利要求7所述试剂盒中的所述引物组A中的所述引物2和所述引物3作为引物对A和用所述引物组B中的所述引物2、所述引物4作为引物对B分别对待测家蝇进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；检测各组引物扩增得到的产物，

若所述引物对B扩增得到大小为257bp产物2，则所述待测家蝇的kdr基因的突变位点为L1014F；

所述257bp产物2的核苷酸序列为序列表中的序列7。

10.一种检测待测家蝇中kdr基因型的方法，包括如下步骤：

用权利要求1-3中任一所述的引物或权利要求4或6所述试剂或权利要求7所述试剂盒中的所述引物组A中的所述引物2和所述引物3作为引物对A和用所述引物组B中的所述引物2、所述引物4作为引物对B分别对待测家蝇进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；检测各组引物扩增得到的产物，

若所述引物对B扩增得到大小为257bp产物2，且所述引物对A未扩增得到大小为257bp产物1，则所述kdr基因为含有突变位点L1014F的纯合型基因；

若所述引物对B扩增得到大小为257bp产物2，且所述引物对A扩增得到大小为257bp产物1，则所述kdr基因为含有突变位点L1014F的杂合型基因；

若所述引物对B未扩增得到大小为257bp产物2，且所述引物对A扩增得到大小为257bp产物1，则所述待测家蝇的kdr基因为不含突变位点L1014F的纯合型基因；

所述257bp产物1的核苷酸序列为序列表中的序列6

所述257bp产物2的核苷酸序列为序列表中的序列7；

所述PCR扩增中，以待测家蝇的基因组DNA为模板；

所述PCR扩增的退火温度为62-65℃，所述PCR扩增的退火温度具体为65℃；

所述检测PCR扩增产物的方法为琼脂糖凝胶电泳或测序。