[发明专利]一种副猪嗜血杆菌免疫保护性抗原

权利要求书

1.一种分离克隆的外膜蛋白Hbp B基因，它的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.一种分离克隆的外膜蛋白Hbp B基因，它的编码序列如SEQ ID NO：2所示。

3.一种重组大肠杆菌(Escherichia coli)BL21/pET-28a-Hbp B，其保藏号为CCTCC NO：M 2011228，它包含序列表SEQ ID NO：1所述的基因。

4.一种副猪嗜血杆菌的抗原蛋白，它是由序列表SEQ ID NO：1所述的基因转化大肠杆菌，得到保藏号为CCTCC NO.M 2011228的重组大肠杆菌(Escherichia coli)BL21/pET-28a-Hbp B所表达的。

5.一种副猪嗜血杆菌外膜抗原蛋白的制备方法，其步骤包括：

1)设计引物对，通过PCR扩增方法，从副猪嗜血杆菌SH0165菌株中克隆得到一种外膜蛋白Hbp B基因，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示；

2)将步骤1)的副猪嗜血杆菌SH0165菌株外膜蛋白基因Hbp B插入到原核表达载体pET-28a(+)的EcoR I和Xho I多克隆位点之间，得到中间质粒pET28a-Hbp B；

3)将步骤2)所述的中间质粒pET28a-Hbp B转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，经抗性筛选得到阳性重组大肠杆菌BL21/pET-28a-Hbp B，其保藏号为CCTCC NO：M2011228；

4)将步骤3)所述的重组大肠杆菌在LB液体培养基中培养，经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后进行Western blot分析，得到具有免疫学活性的副猪嗜血杆菌Hbp B蛋白。

6.权利要求1或2所述的基因在制备副猪嗜血杆菌抗原蛋白中的应用。

7.权利要求3所述的重组大肠杆菌在制备副猪嗜血杆菌亚单位疫苗中的应用。

8.权利要求4所述的抗原蛋白在制备副猪嗜血杆菌亚单位疫苗中的应用。