[发明专利]水稻种子谷蛋白GluD-1基因终止子及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种水稻种子谷蛋白GluD-1基因终止子及其应用。

背景技术

植物生物技术的最新发展不仅实现了传统农艺性状的改良(如提高作物产量，增强抗病、抗虫、抗除草剂特性，改良品质等)，而且使植物成为生物医药和工业产品的生物反应器。绝大多数禾本科作物具有产量高、生产成本低、耐储藏、生产规模容易控制、可直接食用等特点，并且其具备体内翻译后修饰的能力，因而成为第二代转基因产物的理想载体。近年来利用水稻种子生产具有保健作用的外源蛋白和可食性疫苗研究发展很快，且已经取得了巨大成功。如维生素A、具有降低血糖作用的大豆球蛋白(Glycinin)、具有预防和治疗缺铁性贫血和提高自身免疫功能的大豆铁蛋白(Ferritin)、具有刺激胰岛素分泌预防糖尿病发生功能的GLP、乙肝疫苗和花粉过敏症疫苗等均成功地在水稻中表达并高水平累积。然而，进一步实现外源基因的高效表达必须在转录和转录后水平同时提高基因表达。启动子主要在转录水平调控基因表达，终止子则在转录和转录后水平同时起调控作用。

尽管目前广泛应用的终止子，如Nos、Ocs，与异源启动子组合后可启动报告基因在植物中的高表达，能够满足生物化学、生理学以及细胞定位方面的研究需求。然而，对于其他能够提高基因表达的终止子研究较少。由于一些重要农艺性状以及植物次生代谢产物都是由多基因控制，提高单个基因的表达对于相关性状改良作用不明显。通过传统转化方法，如重复转化或杂交来实现多基因转化却费时费力。近年来发展起来的多基因转化系统可以在一个表达载体中同时插入多个基因，为了避免转基因同源性过高引起的转基因沉默，这些基因需要由不同的启动子驱动表达，不同的终止子终止转录。

发明内容

本发明的一个目的是提供一个终止子，名称为tGluD-1，该终止子与nos终止子相比，可以提高外源基因的表达水平。

本发明所提供的终止子，为如下1)或2)或3)的DNA分子：

1)由序列表中序列1所示的核苷酸序列组成的DNA分子；

2)与1)限定的DNA的序列至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性的分子；

3)在严格条件下与1)或2)限定的DNA序列杂交的分子。

所述严格条件可为如下：50℃，在7％十二烷基硫酸钠(SDS)、0.5M Na₃PO₄和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在50℃，2×SSC，0.1％SDS中漂洗；还可为：50℃，在7％SDS、0.5M Na₃PO₄和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在50℃，1×SSC，0.1％SDS中漂洗；还可为：50℃，在7％SDS、0.5M Na₃PO₄和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在50℃，0.5×SSC，0.1％SDS中漂洗；还可为：50℃，在7％SDS、0.5M Na₃PO₄和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在50℃，0.1×SSC，0.1％SDS中漂洗；还可为：50℃，在7％SDS、0.5M Na₃PO₄和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在65℃，0.1×SSC，0.1％SDS中漂洗；也可为：在6×SSC，0.5％SDS的溶液中，在65℃下杂交，然后用2×SSC，0.1％SDS和1×SSC，0.1％SDS各洗膜一次。

其中，序列表中序列1由589个核苷酸组成。

含有所述DNA分子的重组载体、表达盒、转基因细胞系、重组菌或重组病毒也属于本发明的保护范围。