[发明专利]利用卵子荧光显微观察快速确定双壳贝类染色体数目的方法

权利要求书

1.一种利用卵子荧光显微观察快速确定双壳贝类染色体数目的方法，其特征在于包括如下步骤：

①卵子固定，吸取浓缩后的卵子悬液加入离心管中，向离心管中加入4％多聚甲醛固定液进行固定，离心后除去上清液，再加入4％多聚甲醛液固定液，继续固定，冷藏保存；

②荧光染色，取上述卵液于离心管中，用0.1mol/L磷酸缓冲液冲洗，离心后卵子沉降下来，弃去多余的磷酸缓冲液，滴加HOECHST 33258荧光染色液，在黑暗环境下染色6～8min；

③冲洗与制片，染色后用0.1mol/L磷酸缓冲液冲洗卵子，吸取卵子于载玻片上，吸干多余水分后滴抗荧光淬灭剂，用盖玻片封片，得到卵子染色体；

④观察与计数，在荧光显微镜的紫外光下观察卵子染色体，挑选30个分裂相清晰的卵子进行染色体计数，将众数的染色体数确定为卵子染色体的数目；

⑤确定贝类染色体数目，卵子染色体数目的两倍即为该种贝类的染色体数目。

2.根据权利要求1所述的利用卵子荧光显微观察快速确定双壳贝类染色体数目的方法，其特征在于所述的4％多聚甲醛固定液采用如下方法配制：

将40g多聚甲醛溶于1000mL 0.1mol/L的磷酸缓冲液中，加热至60～70℃，持续搅拌使之完全溶解，然后滴加NaOH液使溶液清亮，再用0.1mol/L的磷酸缓冲液定容至1000mL，充分混匀即可。

3.根据权利要求1所述的利用卵子荧光显微观察快速确定双壳贝类染色体数目的方法，其特征在于所述的卵子悬液通过如下步骤制得：取待产卵的雌贝于盛有过滤海水的容器中，雌贝就能将卵子排放入海水中，即可得到卵子悬液。