[发明专利]五色荧光矩阵标准物及其制备方法与专用引物组合物有效
申请号: | 201110201443.3 | 申请日: | 2011-07-18 |
公开(公告)号: | CN102260671A | 公开(公告)日: | 2011-11-30 |
发明(设计)人: | 叶健;赵兴春 | 申请(专利权)人: | 公安部物证鉴定中心 |
主分类号: | C12N15/11 | 分类号: | C12N15/11;C12N15/10;C12Q1/68;G01N27/447 |
代理公司: | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人: | 关畅 |
地址: | 100038 *** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 五色 荧光 矩阵 标准 及其 制备 方法 专用 引物 组合 | ||
1.扩增五色荧光矩阵标准物质的引物组合物,其特征在于:它由不同颜色荧光染料标记过的如下5对引物组成:由序列表中序列6所示的DNA和序列表中序列7所示的DNA组成的引物对1,由序列表中序列8所示的DNA和序列表中序列9所示的DNA组成的引物对2,由序列表中序列10所示的DNA和序列表中序列11所示的DNA组成的引物对3,由序列表中序列12所示的DNA和序列表中序列13所示的DNA组成的引物对4,由序列表中序列14所示的DNA和序列表中序列15所示的DNA组成的引物对5。
2.如权利要求1所述的引物组合物,其特征在于:所述引物组合物中,每对引物对中的两条引物之间的摩尔比为1∶1;
所述引物对1、引物对2、引物对3、引物对4和引物对5的摩尔比为如下1)或2):
1)(0.3-0.5)∶(0.1-0.3)∶(0.5-0.7)∶(0.2-0.4)∶(0.2-0.4);优选摩尔比为0.4∶0.2∶0.6∶0.3∶0.3;
2)0.4∶0.2∶0.6∶0.3∶0.3。
3.如权利要求1或2所述的引物组合物,其特征在于:不同颜色荧光染料在每对引物的5’端进行标记;不同颜色荧光染料优选为红色、橙色、黄色、绿色或蓝色荧光染料,更优选是FAM、HEX、TAMAR、TET或ROX。
4.如权利要求1-3中任一所述的引物组合物,其特征在于:所述引物对1、引物对2、引物对3、引物对4和引物对5整体包装或均单独包装。
5.一种制备五色荧光矩阵标准物质的方法,其特征在于,包括如下步骤:
用权利要求1-4中任一所述的引物组合物中的引物对1、引物对2、引物对3、引物对4和引物对5在PCR体系中一次扩增出序列表中序列1、序列2、序列3、序列4和序列5所示的5个DNA片段,得到五色荧光矩阵标准物质。
6.如权利要求5所述的方法,其特征在于:所述PCR体系中的模板是9947A DNA。
7.如权利要求5或6所述的方法,其特征在于:所述PCR体系中扩增条件是:95℃预变性10min;95℃变性30s,60℃退火30s,72℃延伸1min,35个循环;最后60℃延伸60min。
8.权利要求5-7中任一所述的方法制备得到的五色荧光矩阵标准物质。
9.权利要求8所述的荧光矩阵标准物质在毛细管电泳的荧光校准中的应用。
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