[发明专利]一种检测注射用氟罗沙星细菌内毒素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测细菌内毒素的方法，特别是涉及一种检测注射用氟罗沙星细菌内毒素的方法。

背景技术

注射用氟罗沙星为抗菌药，临床用法为静脉滴注，国家标准规定用家兔法进行热原检查来控制其限度，国外药典均未收载此品种。家兔法检查热原即将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。因家兔的热原反应和人是相同的，故此法是较为公认的热原测定方法。但此法费时较长，操作繁琐，不利于动物保护，且实验结果的一致性取决于动物状况、房屋条件和操作。

热原即细菌内毒素的脂多糖。近年来发展的体外热原试验法即鲎试验法，系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定。其原理是利用鲎的变形细胞溶解物与内毒素之间的凝集反应。鲎试剂即鲎变形细胞溶解物，市售专门用于细菌内毒素检测。鲎试验法能检出0.0001μg的内毒素，其灵敏度比家兔法大十倍，且实验操作简单，实验费用低，结果迅速可靠，因而特别适用于生产过程中的热原控制及家兔法不能检测的某些药物制剂，细菌内毒素的检查方法也是各国药典承认的一种通用方法。细菌内毒素的量用内毒素单位（EU）表示，其检查方法包括两种，即凝胶法和光度测定法。

目前已有学者研究氟罗沙星注射液细菌内毒素的检测方法，但他们采用的都是用氟罗沙星注射液原液或细菌内毒素检查用水直接稀释氟罗沙星注射液进行检测的方法。而将此法用于注射用氟罗沙星的细菌内毒素检测时存在干扰，样品不能准确地进行检测，即使改变样品稀释浓度、鲎试剂的灵敏度及样品的pH值，也不能排除干扰。因此，需要一种新的检测注射用氟罗沙星的细菌内毒素的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测注射用氟罗沙星细菌内毒素的方法，以解决现有技术存在的上述问题。

本发明提供一种检测注射用氟罗沙星细菌内毒素的方法，包括利用鲎试剂通过凝胶法或光度测定法检测注射用氟罗沙星，将待测注射用氟罗沙星用二价阳离子溶液稀释后于37±1℃进行检测。由于二价阳离子溶液，如钙离子，镁离子等可以调节注射用氟罗沙星待测液的pH值，补充金属离子，提高鲎试剂反应的灵敏度，保证鲎试剂的反应活性不受干扰。

目前市售可获得的无菌无热原的二价阳离子溶液有湛江安度斯生物有限公司生产的血液保存液专用稀释剂。

本发明检测注射用氟罗沙星细菌内毒素的方法，可避免以上热原检查方法的不足，且操作简便，灵敏准确，可排除干扰，对质量标准的提高、成品的放行及临床使用的安全性都有着积极的意义。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1

1、实验材料：

1.1供试品：注射用氟罗沙星

生产单位：沈阳新马药业有限公司

规格：0.1g  批号：20100703，20100704，20100705；

规格：0.2g  批号：20101221，20101222，20101223；

1.2鲎试剂

1.3细菌内毒素工作标准品（CSE）

生产单位：中国药品生物制品检定所，批号150601-201065，效价180 EU/支。

1.4细菌内毒素检查用水（BET水）

生产单位：湛江安度斯生物有限公司，规格：5ml，批号：1002050。

1.5血液保存液专用稀释剂

生产单位：湛江安度斯生物有限公司，规格：5ml，批号1008310。

2、限值确定

本品的临床用法用量：一次0.2-0.4g（以氟罗沙星计），稀释于250-500ml的5%葡萄糖注射液中避光缓慢滴注。计算限值L=K/M=0.75Eu/mg(K为5Eu/kg·h，M为400mg/60Kg·h)，拟定限值为：每1mg中含细菌内毒素的量应小于0.75 EU。

3、实验方法及结果

3.1鲎试剂灵敏度复核试验

取细菌内毒素工作标准品，加入规定量的细菌内毒素检查用水溶解，然后稀释成4个浓度的细菌内毒素标准溶液。将已充分溶解的待复核鲎试剂加入内毒素标准溶液中，并进行空白对照，进行鲎试剂的标示灵敏度复核，以证明鲎试剂的灵敏度及操作人员该方法的正确性。结果见表1。

 

结论：所用2个厂家各批鲎试剂的灵敏度复核试验结果，均符合规定。