[发明专利]使君子提取物及其提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及使君子提取物及其提取方法。

背景技术

使君子(Quisqualic indica L)为使君子科(Combretaceae)使君子属(Quisqualis)植物，落叶攀援状灌木，生于平地、山坡、路旁等向阳灌丛中，主要分布于东南亚以及我国福建、台湾、四川、广东、广西等地。《本草纲目》记载，该植物的果实、根、叶均可入药，具有杀虫、消积、健脾的作用，临床常用于治蛔虫腹痛，小儿疳积，乳食停滞，腹胀，泻痢等等。

现代研究表明，使君子中主要含有氨基酸、单宁、多糖及其甙类、生物碱、挥发油、蒽醌、甾体、香豆素和萜类化合物。其中，使君子种仁含使君子氨酸约0.5％，以使君子酸钾形式存在；还含有脂肪油23.9％，油中含油酸48.2％，棕榈酸29.2％，硬脂酸9.1％，肉豆蔻酸4.5％及花生酸、甾醇等。临床上常将使君子水煎或炒制后服用，无法有效提取利用使君子中多糖成分，因此，提供一种使君子提取物及从使君子中提取多糖的方法，并将该使君子提取物用于制备治疗肿瘤的药物和/或保健品，具有现实意义。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种使君子提取物及其提取方法。该方法利用生物酶解技术从使君子中提取多糖，获得的使君子提取物中多糖的纯度为72.7～78.2％。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种使君子提取物的提取方法，包括：

步骤1：将使君子果实粉碎过20～80目筛后，乙醇回流，收集剩余物得到使君子粗粉；所述乙醇回流为：以kg/L计，在得到的使君子粉中按照质量体积比1∶2～5加入95％乙醇溶液，60～80℃回流提取2～4h；

步骤2：将步骤1所述使君子粗粉按照步骤1所述乙醇回流1～3次，收集沉淀得到使君子细粉；

步骤3：在步骤2所述的使君子细粉中加入重量比为1∶8～15的水，加热至50～60℃浸泡2～4h，用酸调节pH值至3.5～4.0，每kg所述使君子细粉中分别加入8～160万IU的纤维素酶和8～80万IU的果胶酶，在40～45℃酶解6～8h后，得到使君子酶解液；

步骤4：将步骤3所述的使君子酶解液在90～100℃下浸提1～2h，抽滤后得到第一滤液，收集滤渣，以kg/L计，加入质量体积比为1∶3～5的水，在90～100℃浸泡1～2h后抽滤，得到第二滤液，合并第一滤液和第二滤液，得到使君子滤液，将所述使君子滤液离心后收集上清液，用碱调节pH值至5.5～6.8，过DEAE柱分离纯化，收集洗脱液浓缩后，雾化干燥，制得使君子提取物。

纤维素酶是一种复合酶，主要由外切β-葡聚糖酶、内切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶等组成，还有很高活力的木聚糖酶活力。内切葡聚糖酶随机切割纤维素多糖链内部的无定型区，产生不同长度的寡糖和新链的末端。外切葡聚糖酶作用于这些还原性和非还原性的纤维素多糖链的末端，释放葡萄糖或纤维二糖。β-葡萄糖苷酶可以将纤维二糖、纤维三糖及其他低分子纤维糊精分解为葡萄糖。

果胶酶，分解果胶的一个多酶复合物，通常包括原果胶酶、果胶甲酯水解酶、果胶酸酶，通过它们的联合作用使果胶质得以完全分解。天然的果胶质在原果胶酶作用下，转化成水可溶性的果胶；果胶被果胶甲酯水解酶催化去掉甲酯基团，生成果胶酸；果胶酸经果胶酸水解酶类和果胶酸裂合酶类降解生成半乳糖醛酸。果胶酶可以由黑曲霉(Aspergillus niger)经发酵精制而得，对分解果胶具有良好的作用。作用pH值为：2.5～6.0，最适作用pH值为：3.5～4.5。鉴于此，本发明酶解反应采用纤维素酶和果胶酶共同对使君子进行酶解，是使君子破壁，有利于提取细胞内多糖。

为了保证酶解在纤维素酶和果胶酶的最适条件下进行，本发明提供的提取方法步骤3中用酸调节pH值，所述酸选自磷酸、柠檬酸、盐酸、硫酸中的一种或两种以上的混合酸。

为了将使君子滤液中固液分离，本发明提供的提取方法步骤4中的离心为在6000～8000r/min的条件下离心10～15min。

DEAE凝胶吸附针对性强，解析性能好，回收率高，因此本发明采用DEAE纤维素层析柱分离纯化使君子抽滤、离心后的上清液。

为了达到过DEAE柱分离纯化的最佳效果，本发明提供的提取方法用碱调节步骤4中离心后的上清液的pH值，所述碱选自氢氧化钠、氢氧化钙、氢氧化钾、碳酸氢钠、氨水中的一种或两种以上的混合碱。