[发明专利]一种快速定量检测血液中毒品的试纸条及检测方法

权利要求书

1.一种快速定量检测血液中毒品的试纸条，包括上样垫(1)、标记物垫(2)、NC膜(5)、吸样垫(6)和支撑薄片(8)，其特征在于，所述的上样垫(1)、标记物垫(2)、NC膜(5)和吸样垫(6)依次粘附于不吸水的支撑薄片(8)，标记物垫(2)上包被有标记的抗毒品单抗，NC膜(5)上分别包被有毒品合成免疫抗原构成的检测线T线(3)和羊抗鼠IgG抗体构成的质控线C线(4)，所述试纸条与免疫层析判读仪配套使用进行毒品的定量检测，定量检测范围为0～2000ng/mL。

2.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述的抗毒品单抗通过胶体金标记法、乳胶微球标记法、纳米磁珠标记法或胶体硒标记法标记于标记物垫(2)上。

3.根据权利要求2所述的试纸条，其特征在于，所述的胶体金标记法包括以下的步骤：用氯金酸-柠檬酸三钠还原法制备直径为40nm的胶体金溶液，用0.2M K₂CO₃将溶液pH调到pH7～10，缓慢搅拌，加入抗毒品单抗使其终浓度为5～15μg/ml，继续搅拌，再加入终浓度为0.2％酪蛋白钠，0.1％聚乙二醇20000进行封闭20-40分钟，离心后弃上清，用胶体金工作液复溶至70-80ml，按1ml溶液铺14-18cm²的比例均匀地铺在无纺布上，再置于温度20～25℃、湿度小于30％的干燥间干燥2～4小时。

4.根据权利要求2所述的试纸条，其特征在于，所述的乳胶微球标记法包括以下的步骤：取红色乳胶微球，加入0.1M pH6.5MES混匀，加入10mg/mlNHS和10mg/ml EDC·HCl，离心，去上清，沉淀用硼砂缓冲液重悬，振荡、超声处理即成活化后的乳胶微球；用0.1MpH7～10的硼砂缓冲液将毒品单抗稀释，然后加入活化乳胶微球，振荡、离心、去上清，沉淀用酪蛋白溶液重悬，经超声粉碎、振荡后，重复离心，去上清，沉淀重悬，再次超声粉碎、离心，沉淀加保存液悬浮，即为乳胶微球标记吗啡单克隆抗体结合物，用工作液稀释乳胶抗体结合物溶液，按1ml溶液铺14-18cm²的比例均匀地铺在无纺布上，再置于温度20～25℃、湿度小于30％的干燥间干燥2～4小时。

5.根据权利要求2所述的试纸条，其特征在于，所述的纳米磁珠标记法包括以下的步骤：取磁珠，用50mM MES(pH5.7)配制成1％的纳米磁珠溶液，加入水溶性EDC，35-40℃10min，再加入毒品单隆，35-40℃孵育1.5～2.5小时，然后用磁力架吸附磁珠，将缓冲液更换至0.01M pH7.2的PBS，含0.5％BSA，0.5％Tween，完成标记；再用工作液制成0.3-0.7mg/ml的溶液，按1ml溶液铺20-24cm²的比例均匀地铺在玻璃纤维膜上，干燥2-4小时。

6.根据权利要求2所述的试纸条，其特征在于，所述的胶体硒标记法包括以下的步骤：用抗坏血酸还原亚硒酸制备胶体硒溶液，以0.2MK₂CO₃将溶液pH调到pH7～10，然后将溶液置于磁力搅拌器上缓慢搅拌，缓慢加入安非他命单克隆抗体使其终浓度为5～15μg/ml，继续搅拌，再加入10％的BSA至终浓度为1％进行封闭，12000转离心，弃上清，用工作液复溶至原体积的1/10，按1ml溶液铺14-18cm²的比例均匀地铺在无纺布上，再置于温度20～25℃、湿度小于30％的干燥间干燥2～4小时。

7.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述的NC膜(5)按如下方法进行制备：用0.01M pH7.2PBS将毒品合成免疫抗原分别稀释成0.2～1.0mg/ml，然后用喷膜仪在NC膜上按1.0-1.5μl/cm划线包被，同时包被羊抗鼠IgG抗体作为C线，包被完成后将NC膜置于干燥间干燥8～10小时。

8.一种快速定量检测血液中毒品的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)加样：将被检血液样本平衡至室温，将制备好的试剂卡平放，向加样孔加入待检样本10～20μl，然后在上样垫上加稀释液60～100μl；

(2)根据试剂条上线条的颜色强度以及免疫层析判读记录仪中内存的标准曲线，可定量检测出血液中毒品的浓度。