[发明专利]一种快速定量检测HCG的试纸条及检测方法

权利要求书

1.一种快速定量检测HCG的试纸条，包括上样垫(1)、标记物垫(2)、NC膜(3)、吸样垫(4)和塑料板(8)，其特征在于，所述试纸条与免疫层析判读仪配套使用进行HCG的定量检测，对待测样品进行稀释后定量检测范围为10～15000mIU/ml。

2.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述的上样垫(1)、标记物垫(2)、NC膜(3)和吸样垫(4)依次粘附于塑料板(8)，标记物垫(2)上包被有胶体金标记的鼠抗HCG-β单克隆抗体，NC膜(3)上分别包被有鼠抗HCG-α抗体构成的检测线T线(6)和羊抗鼠IgG抗体构成的质控线C线(7)，同时在NC膜(3)上检测线T线(6)靠近标记物垫(2)一侧划有用于标示加样位置的加样指示线(5)。

3.根据权利要求1所述的试剂条，其特征在于，所述的试剂条通过以下的步骤进行制备：

(1)胶体金标记鼠抗HCG-β单克隆抗体标记物垫的制备：用氯金酸-柠檬酸三钠还原法制备直径为40nm的胶体金溶液，制备完成后取三份胶体金溶液，分别用0.2MK₂CO₃将溶液pH调到pH7.5、pH8.5、pH9.5、然后将溶液置于磁力搅拌器上缓慢搅拌，按每100ml溶液0.5mg、1.0mg、1.5mg鼠抗HCG-β单克隆抗体缓慢滴加到胶体金溶液中，继续搅拌1小时，再加入终浓度为0.2％BSA，0.1％聚乙二醇20000进行封闭30分钟，12000转离心30分钟，弃上清，用胶体金工作液复溶至76.5ml，按1ml溶液铺16cm²的比例均匀地铺在无纺布上，再置于温度20～25℃、湿度小于30％的干燥间干燥2～4小时，制成标记物垫，备用；

(2)鼠抗HCG-α抗体包被：用0.01M pH7.2PBS将鼠抗HCG-α抗体分别稀释成1.0mg/ml、1.5mg/ml、2.0mg/ml，然后用喷膜仪将鼠抗HCG-α抗体包被液在NC膜上按1.3ul/cm划线包被，构成检测线T线；同时包被羊抗鼠IgG抗体作为C线，同时在NC膜上检测线T线靠近标记物垫一侧划有用于标示加样位置的加样指示线，包被完成后将NC膜置于干燥间干燥3～4小时，备用；

(3)试纸条的装配：在温度20～25℃、湿度小于30％的干燥室内，取塑料支撑板，将已包被的NC膜放置在塑料支撑板的中部粘贴，在NC膜T线一侧搭接标记物垫，在标记物垫另一侧搭接粘贴上样垫，在NC膜C线一侧距边缘搭接吸样垫；然后用裁剪机将贴好的塑料板切成适当宽度的试纸条。

4.一种定量检测HCG的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)仪器内存标准曲线的绘制：以国家参考品为参比，将HCG标准品溶液用正常人尿液(阴性)或牛血清稀释成浓度为0mIU/ml、10mIU/ml、50mIU/ml、250mIU/ml、1000mIU/ml、2500mIU/ml、5000mIU/ml、10000mIU/ml、15000mIU/ml系列标准品，平衡至室温，将制备好的试剂条平放，在NC膜标示线上加入3～5ul待检标准品，然后向上样垫上加入60～80ml样本稀释液，静止10分钟后放入配套的免疫层析判读仪中进行读数，以测得GOD值(X)作为横坐标，以HCG含量(y)作为纵坐标，绘制仪器内存标准曲线。

(2)按照步骤(1)的方法检测待测样品，并通过标准曲线获得所述待测样品的HCG浓度。