[发明专利]用于伤口愈合的体内基因转移

说明书

本申请是分案申请，原申请的申请日为1997年4月11日，申请号为97195326.0(PCT/US97/07301)，发明名称为“用于伤口愈合的体内基因转移”。

1.介绍

本发明涉及将编码感兴趣治疗蛋白的DNA提呈和直接转移到哺乳动物修复细胞中的新型体内方法。该方法涉及将含有感兴趣DNA的基质(本文称为“基因活化基质”)植入新鲜的伤口部位。正常起源于伤口周围活组织的修复细胞增殖并迁移到该基因活化基质中，在其中它们遇到该DNA，将其吸收并进行表达。转染的修复细胞因此用作原位生物反应器(定位于该伤口部位中)，产生使该伤口愈合的药物(DNA编码的RNA、蛋白等等)。

本发明还涉及可以用于实施本发明以转移该感兴趣DNA的药用组合物。这类组合物包括与该感兴趣DNA联用的合适的基质。

2.发明背景

2.1伤口愈合

目前可利用的伤口愈合疗法涉及给与治疗蛋白。这类治疗蛋白可以包括参与正常愈合过程的调节因子，诸如系统性激素、细胞因子、生长因子和调节细胞增殖和分化的其它蛋白。报道具有这种伤口愈合能力的生长因子、细胞因子和激素包括例如蛋白转化生长因子-β超家族(TGF-β)(Cox，D.A.，1995，Cell Biology International，19：357-371)、酸性成纤维细胞生长因子(FGF)(Slavin，J.，1995，Cell Biology International，19：431-444)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和诸如甲状旁腺激素(PTH)之类的钙调节剂。

许多问题与在伤口愈合疗法中使用治疗蛋白(即细胞因子)有关。首先，治疗蛋白的纯化和/或重组生产常常是一个昂贵耗时的过程。尽管进行了最大的努力，但是纯化的蛋白制剂常常不稳定，使得贮存和使用麻烦，蛋白的不稳定性可能导致意外的对该宿主有毒的炎症性反应(对于蛋白分解产物)。

第二，治疗蛋白(即细胞因子)的系统性传递可能与未受伤组织的严重的不良副作用有关。由于传递到机体特定细胞和组织的效率低，需要给与高剂量的蛋白，以确保足够量的该蛋白到达合适的组织靶。由于蛋白水解降解，所述蛋白在机体内的半衰期短，所述蛋白也必须重复给与，这可能导致对所述治疗蛋白的免疫反应。由于给与的蛋白的多效性，高剂量的治疗蛋白的循环常常是有毒的，并且可能产生严重的副作用。

第三，重组蛋白的外源传递的效率低。已经试图通过治疗蛋白的固定化将高剂量的蛋白的给与限制在靶部位。然而，该治疗方法对于重复给药而言使该蛋白的再给与复杂化。

第四，对于诸如膜受体、转录因子和胞内结合蛋白之类的各种蛋白而言，生物学活性取决于正确地表达和在该细胞中的定位。对于许多蛋白而言，当所述蛋白在所述细胞内进行翻译后修饰时，发生正确的细胞定位。因此，这类蛋白不能以这一方式外源给与来进行吸收和正确地在该细胞内定位。

正如这些问题所证明的，目前用于伤口愈合的重组蛋白疗法是有缺点的，因为它们不能提供一个合理的方法用于传递外源蛋白。这些蛋白(即细胞因子)通常是以生理量在其作用位点产生的，并且有效地传递到细胞表面的信号受体。

2.2基因治疗