[发明专利]检测登革病毒及分型的方法及专用芯片和试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测登革病毒血清型的探针，为如下1)至4)中的至少一种：

1)、用于检测I型登革病毒的探针，其核心杂交序列为SEQ ID NO：1所示，

2)、用于检测II型登革病毒的探针，其核心杂交序列为SEQ ID NO：2所示，

3)、用于检测III型登革病毒的探针，其核心杂交序列为SEQ ID NO：3所示，

4)、用于检测IV型登革病毒的探针，其核心杂交序列为SEQ ID NO：4所示。

2.一种用于检测登革病毒血清型的生物芯片，包括生物芯片片基和连接在其上的检测探针；

所述检测探针为如下1)和2)所示：

1)用于检测登革病毒的通用探针，其核心杂交序列为SEQ ID NO：5所示；

2)如下2)-1至2)-4中的至少一种：

2)-1、用于检测I型登革病毒的探针，其核心杂交序列为SEQ ID NO：1所示，

2)-2、用于检测II型登革病毒的探针，其核心杂交序列为SEQ ID NO：2所示，

2)-3、用于检测III型登革病毒的探针，其核心杂交序列为SEQ ID NO：3所示，

2)-4、用于检测IV型登革病毒的探针，其核心杂交序列为SEQ ID NO：4所示。

3.根据权利要求2所述的生物芯片，其特征在于：所述检测探针的核心杂交序列的5′端连接有由聚T组成的直链DNA片段和一个伯氨基。

4.根据权利要求3所述的生物芯片，其特征在于：所述由聚T组成的直链DNA片段为15个T组成的直链DNA片段。

5.根据权利要求2-4中任一所述的生物芯片，其特征在于：所述生物芯片片基为表面为醛基的生物芯片片基。

6.根据权利要求2-5中任一所述的生物芯片，其特征在于：所述探针与所述片基通过所述探针上的伯氨基与所述片基上的醛基共价连接。

7.一种用于检测登革病毒血清型的试剂盒，包括权利要求2-6中任一所述的生物芯片和扩增样品中与所述探针杂交的目的片段的引物对组合物；

所述引物对组合物为如下I和II所示：

I、用于扩增通用型登革病毒目的片段的引物对：SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：7；

II、如下II-1至II-4中的至少一种：

II-1、用于扩增I型登革病毒目的片段的引物对：SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：9；

II-2、用于扩增II型登革病毒目的片段的引物对：SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：

II-3、用于扩增III型登革病毒目的片段的引物对：SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：13；

II-4、用于扩增IV型登革病毒目的片段的引物对：SEQ ID NO：14和SEQ ID NO：15。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于：所述引物对组合物中每对引物中至少一个引物上标记了生物素；

所述试剂盒还包括链霉亲和素修饰的信号分子。

9.根据权利要求7或8所述的试剂盒，其特征在于：

所述链霉亲和素修饰的信号分子为磁珠颗粒、纳米金颗粒、荧光颗粒、化学发光颗粒或化学显色颗粒。

10.一种用于检测登革病毒血清型的方法，包括如下步骤：

1)提取待测样品的RNA，反转录成cDNA；

2)用权利要求7-9中任一所述试剂盒中的引物对组合物对所述cDNA进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；

3)将所述PCR扩增产物与权利要求7-9中任一所述试剂盒中的生物芯片杂交；

4)将步骤3)杂交后的生物芯片用链霉亲和素包被的信号分子标记，检测结果；如果所述生物芯片上连接有用于检测I型登革病毒的探针的部位显示标记上被链霉亲和素包被的信号分子，则确定该待测样品中含有I型登革病毒；如果所述生物芯片上连接有用于检测II型登革病毒的探针的部位显示标记上链霉亲和素包被的信号分子标记，则确定该待测样品中含有II型登革病毒；如果所述生物芯片上连接有用于检测III型登革病毒的探针的部位显示标记上链霉亲和素包被的信号分子标记，则确定该待测样品中含有III型登革病毒；如果所述生物芯片上连接有用于检测IV型登革病毒的探针的部位显示标记上链霉亲和素包被的信号分子标记，则确定该待测样品中含有IV型登革病毒。