[发明专利]一种提高里氏木霉纤维素酶液体深层发酵水平的方法

权利要求书

1.一种提高里氏木霉纤维素酶液体深层发酵水平的方法，其中，包括以下步骤：

一级种子培养：将PDA斜面培养基上活化后的里氏木霉(Trichoderma reesei CICC 13052)菌株或其衍生菌株或其突变株制备成孢子悬液，按照第一百分比的接种量接种于新鲜的种子培养基中进行培养；

发酵培养：将处于对数生长期的一级种子液按照比第一百分比大的第二百分比的接种量接种至新鲜的发酵培养基中进行培养，分段控制发酵过程中罐内的pH值和溶解氧，使pH值和溶解氧在不同时段维持在不同的水平，并进行补料控制培养。

2.如权利要求1所述的提高里氏木霉纤维素酶液体深层发酵水平的方法，其中，所述第一百分比为3％，第二百分比为5％，并且在发酵培养步骤之后，还包括检测发酵液中的纤维素酶活力的步骤。

3.如权利要求1所述的提高里氏木霉纤维素酶液体深层发酵水平的方法，其中，在一级种子培养的步骤中，PDA斜面培养条件为将接种后的里氏木霉菌株在28～32℃恒温培养箱中培养6～7天。

4.如权利要求1所述的提高里氏木霉纤维素酶液体深层发酵水平的方法，其中，在一级种子培养的步骤中，所述孢子悬液的浓度为10⁶～10⁹个/mL。

5.如权利要求4所述的提高里氏木霉纤维素酶液体深层发酵水平的方法，其中，在一级种子培养的步骤中，所述种子培养基的重量百分比组成为：微晶纤维素1～3％，玉米浆1～2.5％，葡萄糖0.5～3％，其余为水，且调节初始pH为4～6。

6.如权利要求5所述的提高里氏木霉纤维素酶液体深层发酵水平的方法，其中，在一级种子培养的步骤中，种子培养条件为：将按照3％的接种量接种于新鲜的种子培养基中的里氏木霉菌株，于28～30℃的条件下，以转速170～200转/分速率的摇床上震荡培养24～36h。

7.如权利要求1所述的提高里氏木霉纤维素酶液体深层发酵水平的方法，其中，在一级种子培养的步骤中，发酵培养基的重量百分比组成为：微晶纤维素3～6％，玉米浆2～5％，(NH₄)₂SO₄ 0.3～0.8％，KH₂PO₄ 0.4～0.8％，甘油0.15～0.6％，CaCO₃ 0.15～0.5％，MgSO₄ 0.06～0.18％，其余为水，且调节初始pH4.5～5.5。

8.如权利要求1所述的提高里氏木霉纤维素酶液体深层发酵水平的方法，其中，所述发酵培养条件及控制策略为：发酵开始至24～36小时对发酵罐内pH和溶解氧不加控制，24～36小时后控制发酵液pH维持在4.5～5.5，24～90小时控制发酵液中溶解氧维持在25～55％，90小时后维持在15～30％直至发酵结束，并且发酵36～48小时后开始加入新鲜补料培养基直至72～90小时，总发酵时间为140～200小时，停止发酵。

9.如权利要求8所述的提高里氏木霉纤维素酶液体深层发酵水平的方法，其中，所述溶解氧的控制通过调节搅拌转速和通气量来完成。

10.如权利要求5或7所述的提高里氏木霉纤维素酶液体深层发酵水平的方法，其中，培养基的加入方式是一次性加入、分批加入、流加或分批与流加相结合的方式。