[发明专利]一种安全、高效生产1，3丙二醇的方法

权利要求书

1.一种安全、高效转化甘油生产1，3-丙二醇的方法，其特征在于，通过特定改进的Red重组系统，敲除克雷伯氏杆菌中引起荚膜产生的wzi基因，从而提高1，3-PD发酵的安全性和产物分泌性能。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的特定改进的Red重组系统为：pKD46-Tc，pCP20-Tc，具体如下：

pKD46-Tc是在pKD46的amp抗性基因上利用限制性酶酶切连接插入四环素抗性基因得到的；

pCP20-Tc是在pCP20的amp抗性基因上利用限制性酶酶切连接插入四环素抗性基因得到的；

上述限制性酶切位点为Xmn I，四环素抗性基因来源于pBR322质粒，以PCR扩增得到。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述敲除克雷伯氏杆菌中引起荚膜产生的wzi基因，具有下列关键特征：

设计三对特定引物，1)F-FRT(SEQ ID No.1)和R-FRT(SEQ ID No.2)，扩增FRT位点的kan抗性基因片段FK；2)Fup-wzi(SEQ ID No.3)和Rup-wzi::FRT(SEQ ID No.4)，扩增wzi片段的上游250bp的序列；3)Fdown-FRT::wzi(SEQ ID No.5)和Rdown-wzi(SEQ ID No.6)，扩增wzi片段下游250bp的序列；

采用两步PCR技术，得到打靶片段Δwzi::FK(1981bp)；

获得的敲除荚膜基因wzi的克雷伯氏杆菌的基因表型含有序列SEQ ID No.7。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其特征在于，所述用于转化甘油生成1，3-丙二醇的菌株为克雷伯氏杆菌Klebsiella pneumoniae。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述发酵过程采用甘油为碳源。