[发明专利]采用反转录环介导等温扩增技术检测烟草病毒的方法

权利要求书

1.一种采用反转录环介导等温扩增技术检测多种烟草病毒的方法，其中该方法包括烟草病毒总RNA提取，RT-LAMP反应和电泳检测，确定病毒种类，其中烟草病毒选自黄瓜花叶病毒(CMV)、马铃薯Y病毒(PVY)、烟草蚀纹病毒(TEV)、烟草花叶病毒(TMV)和烟草脉带花叶病毒(TVBMV)中的2种或2种以上，其中RT-LAMP反应采用的引物是包含如下5组引物中的2组或2组以上引物的引物组：

第1组引物，用于CMV病毒的RT-LAMP反应：

外引物(F3和B3)：

SEQ ID NO.1：5’-TCTACCGTGTGGGTGACA-3’；

SEQ ID NO.2：5’-GAGCACGGCGTACTTTCG-3’；

内引物(FIP和BIP)：

SEQ ID NO.3：5’-CCGTCCGCGAACATAGCAGAG-GTCCGTAAAGTTCCTGCCTC-3’；

SEQ ID NO.4：5’-GCTGCATCTGGAGTCCAAGCC-TGTCGCCAATATCAGCGC-3’；

第2组引物，用于PVY病毒的RT-LAMP反应：

外引物(F3和B3)：

SEQ ID NO.5：5’-CGCGCTATGCCTTTGACTT-3’；

SEQ ID NO.6：5’-TTGGAGAGACATCCTCGGT-3’；

内引物(FIP和BIP)：

SEQ ID NO.7：5’-CAATGCTGCGGCCTTCATTTGA-GGTCACATCACGAACACCAG-3’；

SEQ ID NO.8：5’-TCAGCCCAACCTCGACTTTTCG-GCCTCTCTGTGTTCTCCTCT-3’；

第3组引物，用于TEV病毒的RT-LAMP反应：

外引物(F3和B3)：

SEQ ID NO.9：5’-AAAACGCGCAGCCAACAT-3’；

SEQ ID NO.10：5’-CGTACTGCAGCAGCTTTCA-3’；

内引物(FIP和BIP)：

SEQ ID NO.11：5’-GGCATGTATGGTCGTTCCCTGT-GACACACTTCAGTGACCTGG-3’；

SEQ ID NO.12：5’-TTGTCACGCTATGCGTTCGACT-TTGCATATGCGCCTCCCT-3’；

第4组引物，用于TMV病毒的RT-LAMP反应：

外引物(F3和B3)：

SEQ ID NO.13：5’-GGAAACCTTCACCACAAGT-3’；

SEQ ID NO.14：5’-TATAGCGCTCCTTATGGC-3’；

内引物(FIP和BIP)：

SEQ ID NO.15：5’-GCTGTGACTAACGGATCTAATACCG-AGGTTCCCTGACAGTGAC-3’；

SEQ ID NO.16：5’-GAAGTTGAAAATCAGGCGAACCC-TGCGTCGTCTACTCTACG-3’；

第5组引物，用于TVBMV病毒的RT-LAMP反应：

外引物(F3和B3)：

SEQ ID NO.17：5’-AACGGAATGTGGGTCATG-3’；

SEQ ID NO.18：5’-TGTCATGTCAGTCAAATTGC-3’；

内引物(FIP和BIP)：

SEQ ID NO.19：5’-TGTTGGTTTGGCATGTTCCA-GATGGTGATGAACAGGTTG-3’；

SEQ ID NO.20：5’-TAGACAAATCATGGCACACTTTAGC-GGCATATACGGTTTCTCTGC-3’。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述引物组中包含5组引物SEQ ID NO.1-20。