[发明专利]一种人血液H-FABP纳米金标检测试纸条及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术应用领域，具体涉及一种人血液中心脏型脂肪酸结合蛋白（Heart-type Fatty Acid Binding Protein，H-FABP）纳米金标检测试纸条及制备方法。 

背景技术

H-FABP存在于心肌细胞胞浆内，含量丰富。心肌受损早期，心肌细胞膜完整性被破坏，H-FABP进入血液。H-FABP在心肌受损后1-2h即可在血液中检测到。由于H-FABP心肌特异性高于目前临床常用的肌红蛋白，因此H-FABP可成为一种重要的检测急性心肌组织损伤的早期特异性标志物。目前，生化标志物的检测已广泛应用于急性心肌梗死、不稳定型心绞痛、急性心衰、心肌炎、心脏手术损伤评估、窒息新生儿心肌损伤等心肌损伤疾病的诊断、危险度分层和预后评判。美国每年因怀疑性冠状动脉综合征急诊就医病人达8000万，其中45%左右与心脏相关，15%诊断为急性冠脉综合征。我国急性冠状动脉综合征的发病率约50/10万，每年死于急性心肌梗死的人数超过100万。因此，H-FABP检测的应用具有重要的社会和经济效益。 

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在的不足，本发明的目的是提供一种人血液H-FABP纳米金标检测试纸条，使其具有操作简便、灵敏度<7ng/mL、结果稳定等优点。本发明的另一目的是提供上述检测试纸条的制备方法。 

技术方案：为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下： 

一种人血液H-FABP纳米金标检测试纸条，包括设在固定板上依次相连的样品垫（1）、金标垫（2）、硝酸纤维素膜（3）和吸水纸（4）；在硝酸纤维素膜（3）上设有检测线抗体（5）和质控线抗体（6）；在金标垫（2）上设有金标抗体。

所述的金标垫（2）为聚酯纤维膜制成的垫。 

所述的样品垫（1）为玻璃纤维膜制成的垫。 

所述的金标抗体为显色抗体，检测线抗体为捕捉抗体，显色抗体与捕捉抗体为2株可互相配对形成夹心的抗人H-FABP单克隆抗体。 

所述的金标抗体用40nm纳米金壳标记。 

一种制备人血液H-FABP纳米金标检测试纸条的方法，包括以下步骤： 

（1）采用“种子”生长法制备策略，以柠檬酸三钠为稳定剂和还原剂，制备出单分散的银纳米颗粒作为牺牲模板，通过置换反应获得胶体级、高分散的金纳米壳（40nm）。

（2）调节纳米金壳溶液pH8.0～8.5，加入显色抗体（1株抗人H-FABP单克隆抗体）与纳米金壳溶液反应，离心得沉淀，重悬沉淀，得金标抗体溶液； 

（3）将聚酯纤维膜预处理后，烘干，用金标抗体溶液喷印；

（4）用捕捉抗体（1株抗人H-FABP单克隆抗体BT01）在已活化硝酸纤维膜上喷划检测线，真空干燥；然后用羊抗鼠IgG在已活化硝酸纤维膜上喷划质控线，真空干燥；

（5）按样品垫、金标垫、硝酸纤维膜、吸水纸顺序粘贴在单面压敏胶的塑料板上，切割，装入塑料卡，包装；

其中，采用2株可互相形成夹心配对的抗人H-FABP抗体，其中1株作为捕捉抗体BT01，1株作为显色抗体BT02；用40nm纳米金壳标记显色抗体。

上述人血液H-FABP纳米金标检测试纸条在检测人血液中H-FABP的应用。 

有益效果：本发明的人血液H-FABP纳米金标检测试纸条，使用中空的金纳米壳代替目前胶体金试纸条常用的球形纳米颗粒。应用于人H-FABP检测，特异性高，由于中空金纳米壳所呈现的颜色（墨绿色），在基于白色背景下能比球形金纳米颗粒（暗红色）产生更好的分辨光信号。而且由于中空金壳的重量轻于同样大小的实心纳米金颗粒（平均直径均为40nm），其免疫层析的速度加快，有利于试纸的快速检测。结果易观察，灵敏度达到7ng/mL，15-30min内就能判读结果，具有良好的稳定性和重复性，操作简便，无需特殊仪器设备，可应用于急性心肌梗死和急性心肌损伤的早期诊断，尤其适宜在广大基层医院推广和应用。 

附图说明

图1是试纸条的结构示意图。 

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步的说明。 

实施例1 

（1）纳米金壳溶液的制备：