[发明专利]一种千层塔原叶体诱导和增殖方法

权利要求书

1.一种千层塔原叶体诱导和增殖方法，其特征在于，按以下步骤进行：

（1）外植体的选择

从野外采集蛇足石杉的孢子囊，经自来水冲洗干净；

（2）外植体的表面灭菌

将洗干净的孢子囊在超净工作台中先浸在质量分数为70%的乙醇溶液中30s~60s；接着置于浓度0.1%的HgCl₂溶液中浸泡5min ~8min，再用无菌水冲洗3-5次，将孢子囊或者孢子囊破裂后从中散出的孢子作为千层塔原叶体诱导的外植体；

（3）原叶体的诱导培养

将得到的外植体接种在原叶体诱导培养基上，在培养温度为22±2℃、光照时间12/d~16/d、光照强度为300 Lx~2000 Lx条件下培养10-12周，从外植体上长出绿色的原叶体组织；

（4）原叶体的增殖

将步骤（3）中获得的原叶体组织切割成0.2cm²~0.5cm²的小片，然后转入原叶体增殖培养基上继续培养，培养条件与步骤（3）中相同，培养6周后，获得大量的新增殖的原叶体。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（3）中的原叶体诱导培养基组成为：在常规的MS培养基中加入3-吲哚丁酸0.2mg/L~2mg/L。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（4）中的原叶体增殖培养基组成为：在常规的MS培养基中加入2，4-二氯苯氧乙酸0.2mg/L~1mg/L和6-苄氨基嘌呤0.5mg/L~2 mg/L。