[发明专利]生物复合酶生产方法

说明书

技术领域：

本发明属于生物技术领域，特别涉及生物复合酶产品。

背景技术

生物复合酶普遍应用于纺织、食品加工、医药、发酵、烟草陈化、饲料等行业。但应用于改善土壤，促进农作物生长尚属首次，未见资料报导。

工业微生物生产的非常规胞外复合酶与胞内复合酶的合理配伍，能有效促进其它微生物的生长。并对大部分生物、代谢物的产生具有正面效应，同时对微生物酶激活作用明显，提出了开发发酵行业制剂产品的设想。

同时研发了针对土壤微生物的复合酶制剂(土壤生物复合酶)，从大发酵概念上看，地球可看做一个发酵罐，土壤微生物的生长，土壤有机质的合理转化，对植物生长的促进作用不可估量。我们认为利用工业微生物的代谢酶，促进并激活土壤微生物及植物的内源酶活性，促进微生物及植物生长。对土壤改善与提高作物产量具有重大意义。由于化肥的长期使用，会损害土壤合适的菌群结构及土壤的团粒结构。所以保护生态及地力已成为目前农业问题的重点。因为农业生产大量使用化肥，植物对化肥的依赖度不断加大，抑制了土壤转化能力。有机肥作用难以充分发挥，土壤结构不宜改善。

发明内容

本发明的目的是提供生物复合酶生产方法。

本发明产品的具体生产方法步骤如下：

分别培养制备泡盛曲霉培养物、植物乳杆菌剂、枯草芽孢杆菌菌剂；菌剂按照如下比例复配混合：泡盛曲霉培养物50-80份。植物乳杆菌剂5-10份，枯草芽孢杆菌菌剂20-40份。

具体如下：1.菌剂培养制备：

枯草芽孢杆菌剂培养制备：枯草芽孢杆菌菌剂制备：从斜面转接培养枯草芽孢杆菌，逐级扩培后的种子液转接入发酵罐中，发酵完毕离心分离获得湿菌体和发酵液；发酵完毕发酵液经低温负压真空浓缩到原体积的40-50％，得到菌浓缩液。添加载体：向浓缩液中添加混合好的载体，混合均匀；浓缩液与载体的重量比为0.5-0.7∶1，载体组成为：CaCO₃ 20-40份，糊精10-20份。流化床干燥，干燥温度50℃。

植物乳杆菌剂的制备方法：从斜面转接培养植物乳杆菌，逐级扩培后的种子液转接入发酵罐中，发酵完毕发酵液经低温负压真空浓缩到原体积的45％，得到菌浓缩液。添加载体：向浓缩液中添加混合好的载体，混合均匀；浓缩液与载体的重量比为0.5-0.7∶1，载体组成为：CaCO₃ 20-40份，糊精10-20份。流化床干燥，干燥温度50℃。

泡盛曲霉培养物制备：菌种培养，固体发酵培养：孢子液接种到米曲霉固态发酵培养料中，26-35℃培养至菌丝长满培养料，低温流化床干燥，粉碎干燥物；

2.菌剂复配比例如下：

泡盛曲霉培养物50-80份。植物乳杆菌剂5-10份，枯草芽孢杆菌菌剂20-40份；采用的菌种为常见枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis subsp)，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)和泡盛曲霉(Aspergillu sawamori)。

本发明中酶活力单位IU定义为1分钟内催化1微摩尔底物转化所用的酶量。

本发明中采用微生物平板计数方法检测活菌数。

本发明中采用常规酶活力检测方法检测酶活。

本发明方法得到产品由泡盛曲霉培养物。植物乳杆菌剂和枯草芽孢杆菌菌剂组成，所述生物复合酶每克产品中枯草芽孢杆菌4.0～9.5×10⁸个、泡盛曲霉4.0～8.5×10⁷个、蛋白酶150～200IU、β-葡聚糖酶200～250IU、木聚糖酶50～150IU、纤维素酶100～120IU、淀粉酶250～300IU。

所述生物复合酶由泡盛曲霉培养物50-80份、植物乳杆菌剂5-10份、枯草芽孢杆菌菌剂20-40份组成；上述比例为质量比。

本发明中菌剂复配的较优比例为：泡盛曲霉培养物60-80份，植物乳杆菌剂5-8份，枯草芽孢杆菌菌剂20-30份。

本产品使用方法简单，每亩地使用量0.3-1公斤，成本仅为80-100元/亩，拌种或生长期灌水前地表喷洒。

有益效果：