[发明专利]一种腺苷钴胺的制备方法

权利要求书

1.一种腺苷钴胺的制备方法，其特征步骤包括：

①向腺苷钴胺发酵液中加入絮凝剂和助滤剂，过滤，得菌丝体和一次滤液；

②菌丝体加水悬浮，并加入沉降剂，调PH为4.5～6.0，加热使细胞壁破壁，过滤，得悬浮滤液；

③悬浮滤液经阳离子交换树脂进行交换，并用弱碱置换得到阳柱解析液；

④在阳柱解析液中加入沉降剂，调PH为4.5～6.0，过滤，得二次滤液；

⑤二次滤液经大孔树脂柱吸附、展层、解析得到大孔解析液；

⑥大孔解析液经蒸发去除丙酮得到浓缩液；

⑦浓缩液经阴离子交换树脂交换，得到脱色液；

⑧先将脱色液PH调为4.5～6.0，再经大孔树脂吸附，解析得到结晶原液；

⑨向结晶原液中加入丙酮，经动态结晶、静态结晶，得到成品腺苷钴胺。

2.根据权利要求1所述的腺苷钴胺的制备方法，其特征在于：步骤①中所述腺苷钴胺发酵液是以脱氮假单孢菌为生产菌制备的。

3.根据权利要求1所述的腺苷钴胺的制备方法，其特征在于：步骤①中所述絮凝剂为二价锌离子，其用量为3～7kg/立方米发酵液，所述助滤剂为二价钙离子，其用量为2～5kg/立方米发酵液。

4.根据权利要求3所述的腺苷钴胺的制备方法，其特征在于：所述絮凝剂为氯化锌或硫酸锌；所述助滤剂为氯化钙。

5.根据权利要求1所述的腺苷钴胺的制备方法，其特征在于：步骤②中悬浮操作时水与菌丝体的重量比为(4～6)∶1；沉降剂的用量为菌丝体滤泥重量的0.2～0.4％；细胞壁破壁操作时的加热温度为80～92℃，加热持续时间为20～40分钟。

6.根据权利要求1所述的腺苷钴胺的制备方法，其特征在于：步骤③中采用阳离子交换树脂交换腺苷钴胺，其置换剂为5～8％氨水溶液，得到的阳柱解析液用7％的盐酸调PH为4.5～6.0。

7.根据权利要求1所述的腺苷钴胺的制备方法，其特征在于：步骤④中沉降剂的用量为6～10Kg/立方米阳柱解析液；沉降剂为聚合氯化铝和氯化镁的等质量配比混合物。

8.根据权利要求1所述的腺苷钴胺的制备方法，其特征在于：步骤⑥中蒸发操作进行至浓缩液的密度≥0.990g/ml。

9.根据权利要求1所述的腺苷钴胺的制备方法，其特征在于：步骤⑧中用20％的醋酸将脱色液PH调为4.5～6.0，经大孔树脂吸附，再用0.930～0.990g/ml的丙酮水溶液解析得到含腺苷钴胺的结晶原液，其中，丙酮水的用量为大孔树脂体积的2～3倍。

10.根据权利要求1所述的腺苷钴胺的制备方法，其特征在于：步骤⑨中，在搅拌下向结晶原液中加入0.79～0.81g/ml的丙酮，使得最终溶液的密度为0.820～0.840g/ml，搅拌1～2h，静置3～6h后，过滤、洗涤、过筛、干燥，得腺苷钴胺成品。