[发明专利]一种酶法水解制备杠柳苷元的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种制备杠柳苷元的方法，尤其是涉及一种酶法水解制备杠柳苷元的方法。

背景技术

香加皮（Cortex Periplocae ）是萝藦科（Asclepiadaceae）植物杠柳Periploca sepium Bunge的干燥根皮，具有祛风湿、强筋骨的功效，是临床常用中药，用于风寒湿痹，腰膝酸软，心悸气短，下肢浮肿。

杠柳苷元为(3beta,5beta)-3,5,14-trihydroxycard-20(22)-enolide，分子式C₂₃H₃₄O₅，分子量390.5131，分子结构：

杠柳苷元为强心苷元，不仅具有强心作用，还具有抗炎、抗肿瘤等药理作用。顾为等发表的“杠柳苷元对肥大细胞脱颗粒及释放组胺影响的研究”和韩宇博等发表的“杠柳苷元的抗肿瘤作用研究”都对杠柳苷元做了实验验证。

杠柳苷元在中药香加皮中含量较低，制备难度较大，多是以杠柳毒苷为原料水解得来。

杠柳毒苷又叫萝蘑毒苷，五加皮苷G，分子式是C₃₆H₅₆O₁₃，分子量为696.82，是一种具有甾核和不饱和五元内酯环结构的甲型强心苷，结构式含杠柳苷元-D-(加拿大麻糖)-D-(葡萄糖)，1g溶于大约20ml沸水，而在25℃时，大约为1:2500。易溶于乙醇，几乎不溶于乙醚、氯仿。

现有从香加皮中水解制备杠柳苷元方法，多是酸水解法制备。如专利（申请号200610013621.9）“一种杠柳苷元的制备方法”，该专利公开的方法是对含有杠柳毒苷的提取物进行酸水解和收集，得到中间体A，将中间体A进行柱层析，浓缩干燥后得到中间体B，将中间体B重结晶或高效液相制备得杠柳苷元。该法在酸水解产生大量的酸水，污染环境，柱层析过程样品损失较多，同时也产生大量硅胶和氧化铝废弃物，造成环境污染。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足和缺陷，提供一种酶法水解制备杠柳苷元的方法，该方法能够提高产品收率，减少污染。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

一种酶法水解制备杠柳苷元的方法，其特征在于包含以下步骤：

1）取香加皮药材粉碎，加入3-8倍量80-90%甲醇溶液超声提取，提取液回收甲醇，加适量水共沸，趁热离心，得离心液；

2）上述离心液调节pH4.5-5.5，加入生物酶保温酶解18-32小时，酶解液减压浓缩，离心得粗品；

3）上述粗品用高速逆流色谱仪制备，收集流分，干燥得杠柳苷元。

所述的调节pH的酸为柠檬酸或盐酸中的一种。

所述的生物酶可选蜗牛酶、纤维素酶和苦杏仁酶中的一种，用量为原料的1-5‰。

所述的保温酶解温度为47-55℃。

所述的高速逆流色谱制备条件为:溶剂系统选用氯仿/甲醇/水(4/3/3)体系，上相为固定相，转速700-1200r/min，流动相流速1-4ml/min。

在步骤1）中共沸时要充分搅拌，离心过滤可以加适量硅藻土提高效率。

步骤3）中粗品溶解可以氯仿溶解也可以流动相溶解。

本发明的优势在于：

1.    工艺采用超声提取，提取效率高，杂质溶出少。

2.    工艺采用生物酶解，酶解条件温和，不造成分子结构异化，同时废水容易处理。

3.    工艺采用高速逆流色谱分离，产品无损失，无废弃物产生。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式

实施例1：

香加皮药材粉碎，取1000g，加入8L90%甲醇溶液超声提取60min，滤过液体再加3L90%甲醇超声提取30min，合并提取液回收甲醇，加500ml蒸馏水共沸1小时，加适量硅藻土趁热离心，收集离心液，柠檬酸调节pH4.5，加热至50℃，加入1g蜗牛酶保温酶解32小时，酶解液减压浓缩，离心得粗品12g。取氯仿、甲醇、水按4：3：3比例混合，取上相注入色谱柱作固定相，开启高速逆流色谱仪，调整转速800r/min，注入流动相，平衡后，调整流速2ml/min，氯仿溶解粗品，进样，通过检测仪定时收集流分，流分回收试剂干燥，连续制备，得杠柳苷元6.2g，含量96.6%。

实施例2：