[发明专利]Non-B Ig单抗RP215在细胞增殖、迁移及干细胞研究中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及特异性识别人Non-B Ig重链可变区的单克隆抗体RP215在判定细胞在增殖、迁移、化疗药物抗性及识别肿瘤/成体干/祖细胞方面的应用，对提高临床和实验室对肿瘤细胞恶性度及转移的判定、指导临床治疗及对肿瘤/成体干/祖细胞的深入研究具有重要的应用价值。 

背景技术

一、非B细胞免疫球蛋白研究现状 

传统的免疫学理论认为免疫球蛋白基因仅在B淋巴细胞发育过程中进行选择性重排，故免疫球蛋白是B淋巴细胞的特征性产物。但1996年，邱晓彦等通过免疫组化、Western Blot等发现在多种上皮性恶性肿瘤细胞的胞浆中存在与免疫球蛋白抗原性相同且分子结构相似的蛋白分子，而其它正常上皮细胞均为阴性反应(中国免疫学杂志；1996，5：296)；随后邱晓彦等又分别从蛋白水平和mRNA水平证实Ig分子在非B细胞来源的肿瘤细胞中表达；并且发现应用Ig特异的反义寡核苷酸以及抗Ig抗体都可诱导肿瘤细胞凋亡、抑制其生长(CANCER RESEARCH 63，6488-6495，October 1，2003)。目前，我们课题组对于肿瘤来源Ig生物学活性的研究已有了很大发展。我们的研究发现，体外利用ASODN或抗人IgG抗体来抑制肿瘤来源IgG可增加细胞程序性凋亡，抑制细胞生长。在裸鼠体内实验中，抗人IgG抗体可以抑制分泌IgG的癌细胞系HelaMR的生长。而且，不只是肿瘤细胞，一些增殖旺盛的上皮细胞也会表达Ig，增生的乳腺细胞、肝硬化中增殖的肝细胞和癌巢周围的上皮组织中均有Ig分布。在癌前病变中Ig的表达出现上调，说明肿瘤细胞分泌的Ig可能对癌症的发生有重要作用，具有促进肿瘤细胞生长和维持其生存的作用。目前上述发现 已经得到国内外几个课题组的证实和认可(Cancer Res，2006.66(8)：p.3996-4000；Cancer Biomark.，2009.5(4)：p.177-188)。但在过去的10年里，我们课题组及其他的课题组都应用以循环血Ig分子作为免疫原制备的单克隆或多克隆抗体(商品化)，通过免疫组化、Western blot等方法发现了Ig分子、特别是IgG分子在多种非免疫细胞来源的肿瘤组织及一些正常组织细胞中高表达。但用该类抗体没有发现IgG在正常组织中上皮的基底细胞及胆管上皮细胞等具有强分裂能力及迁移能力的细胞及肿瘤肝细胞中高水平表达，并参与细胞迁移及干细胞的功能。 

二、RP215来源及研究现状 

加拿大英属哥伦比亚大学的Lee课题组早在上个世纪80年代，为了获得特异性识别卵巢癌的单克隆抗体，曾用卵巢癌细胞系提取的蛋白免疫动物，获得了近3000株杂交瘤细胞，在筛选的过程中发现，其中有一株杂交瘤细胞，称之为RP215，能够很好地识别卵巢癌细胞而不识别正常卵巢细胞，但当时不清楚其所识别的抗原是什么，暂取命名为“CA215”。后来发现，RP215不但能够很好地识别卵巢癌，同时在对其它类型的肿瘤细胞识别中也显示了良好的特异性，由此将CA215定义为“pan-cancer marker”。2007年，Lee课题组对CA215进行了鉴定。他们用亲和层析的方法，从卵巢癌细胞系培养上清中获得了大量的“CA215”，质谱鉴定所提供的32条肽段均为IgG的重链，为了进一步确认这一结果，他们又用纯化的“CA215”作为抗原制备了5株特异性单抗，实验结果证实，所有5个单抗都识别IgG分子(Cancer Biol Ther，2008.7(12)：p.2007-14.)。至此，证明了CA215就是癌胞表达的IgG(Cancer Biol Ther.，2009.8(2)：p.161-6)。随后的结果证实，癌细胞表达的IgG在糖基化修饰与循环中IgG有明显差异。RP215所识别的表位正是这类IgG重链可变区特有的糖基类相关 表位。尽管已有报道RP215可用于临床肿瘤病人的血清检测(Cancer Biomark.，2009.5(4)：p.177-88.)，但这种抗体在判定细胞在增殖、迁移、化疗药物抗性及识别肿瘤/成体干细胞方面的应用还没有报道。 

三、成体/肿瘤干细胞研究背景