[发明专利]检测己烯雌酚的电化学免疫传感器及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种检测己烯雌酚的电化学免疫传感器，包括基底电极，其特征在于所述的基底电极表面沉积纳米金后，修饰石墨烯-己烯雌酚-壳聚糖复合物，并以牛血清蛋白封闭非特异性活性位点。

2.根据权利要求1所述的电化学免疫传感器，其特征在于，所述的基底电极为玻碳电极。

3.根据权利要求1或2所述的电化学免疫传感器，其特征在于，所述免疫传感器通过下述方法制得：在基底电极表面沉积纳米金，将石墨烯的壳聚糖悬浮液超声分散后与己烯雌酚混合，将混合液滴涂在电极表面，利用壳聚糖将石墨烯和己烯雌酚包被并固定于电极表面，并将电极浸泡在牛血清蛋白溶液中，封闭电极表面的非特异性的活性位点。

4.根据权利要求2所述的电化学免疫传感器，其特征在于，所述免疫传感器通过下述步骤制得：

1）石墨烯-壳聚糖悬浮液的配制：将0.05M的HCl加热至80～90℃，加入称量好的壳聚糖，搅拌溶解，冷却后加入浓度为0.1M的NaOH，调节pH至5，配得1mg/mL的壳聚糖溶液；准确称取5g石墨烯样品于2mL壳聚糖溶液中，超声分散1h，制得石墨烯-壳聚糖悬浮液；

2）玻碳电极处理：直径为3mm的玻碳电极用分别用1.0和0.3μm的Al₂O₃粉乳液打磨抛光后，分别在乙醇和水中各超声清洗3min；

3）纳米金沉积：清洗后的玻碳电极用电化学方法沉积金纳米粒子，于100mg/L的HAuCl₄溶液中，在-0.2V电势下恒电位扫描60s；

4）电极表面修饰：将4μL石墨烯-壳聚糖悬浮液与2μL浓度为0.2mg/mL的己烯雌酚溶液混合，滴涂于步骤3）制得的玻碳电极表面，40℃下烘干30min；

5）非特异性的活性位点封闭：表面修饰后的电极于37℃下浸泡在5%的BSA溶液中30min，以封闭剩余的活性位点，制得所述的电化学免疫传感器。

5.一种检测己烯雌酚的电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于：在基底电极表面沉积纳米金，将石墨烯的壳聚糖悬浮液超声分散后与己烯雌酚混合，将混合液滴涂在电极表面，利用壳聚糖将石墨烯和己烯雌酚包被并固定于电极表面；将电极浸泡在牛血清蛋白溶液中，封闭电极表面的非特异性的活性位点。

6.根据权利要求5所述的电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：

1）石墨烯-壳聚糖悬浮液的配制：将0.05M的HCl加热至80～90℃，加入称量好的壳聚糖，搅拌溶解，冷却后加入浓度为0.1M的NaOH，调节pH至5，配得1mg/mL的壳聚糖溶液；准确称取5g石墨烯样品于2mL壳聚糖溶液中，超声分散1h，制得石墨烯-壳聚糖悬浮液；

2）玻碳电极处理：直径为3mm的玻碳电极用分别用1.0和0.3μm的Al₂O₃粉乳液打磨抛光后，分别在乙醇和水中各超声清洗3min；

3）纳米金沉积：清洗后的玻碳电极用电化学方法沉积金纳米粒子，于100mg/L的HAuCl₄溶液中，在-0.2V电势下恒电位扫描60s；

4）电极表面修饰：将4μL石墨烯-壳聚糖悬浮液与2μL浓度为0.2mg/mL的己烯雌酚溶液混合，滴涂于步骤3）制得的玻碳电极表面，40℃下烘干30min；

5）非特异性的活性位点封闭：表面修饰后的电极于37℃下浸泡在5%的BSA溶液中30min，以封闭剩余的活性位点，制得所述的电化学免疫传感器。