[发明专利]一种纯化、识别胰腺内分泌细胞的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物领域，其涉及到细胞分化，具体涉及一种纯化、识别胰腺内分泌细胞的方法。

发明背景

胰岛细胞移植方法是治疗糖尿病有效手段之一，但来源极为有限。研究如何获得足够多的人胰岛β细胞已成为当前研究的重点课题。据此，发展识别和纯化具胰岛素分泌功能的细胞以及具分化胰岛素分泌功能的干细胞或前体细胞的有效方法已成为当务之急。

胰腺内分泌干细胞(Pancreatic endocrine stem cells，例如Ngn3表达阳性的具分化能力的胰胚细胞)和前体细胞经培养后可分化或分泌胰岛素的细胞，并用于治疗糖尿病患者(Jiang，et al.，Stem Cells 2007；25：1940-53，Eshpeter，et al.，Cell Prolif 2008；41：843-58)。

发明内容

本发明的目的是提供一种纯化胰腺内分泌细胞的方法。

实现上述目的的技术方案如下：

一种纯化胰腺内分泌细胞的方法，该方法包括以下步骤：

(a)选择待纯化分类的候选细胞群；

(b)用检测试剂检测该细胞群中Insm₂表达阳性的细胞；

(c)分离出Insm₂表达阳性的细胞，纯化，得到胰腺内分泌干细胞。

优选地，检测步骤(b)所用的标记检测的试剂包括抗Insm₂抗体或是Insm₂的mRNA的互补核苷酸。

本发明的另一目的是提供一种识别内分泌干细胞或前体细胞的方法，包括以下步骤

(a)一种Insm₂特异检测试剂接触待识别的细胞；

(b)检测Insm₂的表达；

(c)发现Insm₂的出现即为识别出所检出的细胞为内分泌干细胞或前体细胞。优选地，所述检测试验为含有抗Insm₂抗体或一种与Insm₂的mRNA互补的核苷酸。

本发明的另一目的是提供一种识别可调节内分泌细胞功能或启动内分泌细胞增殖化合物的方法。

实现上述目的的技术方案如下：

一种识别化合物的方法，该化合物可调节内分泌细胞功能或启动内分泌细胞增殖，该方法包括常规高通量筛查中的各个步骤如化合物与Insm₂阳性细胞接触，以及测量该化合物对内分泌细胞功能影响。

一种识别Insm₂活性调节因子的方法，包括与纯化的Insm₂接触的一组试验的化合物，选择与Insm₂特异结合的化合物，和测验所选化合物对内分泌细胞功能的影响。

本发明证实Insm₂是Snail/Gfil/Insm₁转录因子家族的新成员，与发育和疾病有重要关系。Insm₂是胰腺内分泌细胞和内分泌细胞前体细胞的标记物。这些细胞可分化成具糖诱导的分泌胰岛素的β细胞。因此，Insm₂可识别和纯化胰腺内分泌细胞和前体细胞。这些细胞经培养后可分化或分泌胰岛素的细胞并用于治疗糖尿病患者(Jiang，et al.，Stem Cells 2007；25：1940-53，Eshpeter，et al.，Cell Prolif 2008；41：843-58)。Insm₂也能用于药物靶标以识别刺激干细胞和前体细胞分化或增殖的分子。Insm₂还能用于帮助识别内分泌干细胞/前体细胞的表面标记。这样就可以采流式细胞仪(FACS)等方法来纯化内分泌干细胞或前体细胞。

附图说明

图1是INSM2基因分析。

图2是人的INSM2和小鼠的Insm2在发育过程中和成年期组织表达水平的检测。

图3是Insm2表达在成年人和小鼠的胰岛细胞中。

图4是Insm2在斑马鱼胚胎发育期的表达。

图5是Ngn3和NeuroD1对Insm2的活化作用。

图6是Ngn3和NeuroD1诱导胰腺mPANC细胞的内源性Insm2的表达。

图7是Insm2在小鼠胚胎发育过程和成年胰岛表达调控的模式图。

具体实施方式

I.引言