[发明专利]毕赤酵母壁蛋白Gcw19及其表面展示系统和构建方法有效
| 申请号： | 201110215853.3 | 申请日： | 2011-07-29 |
| 公开（公告）号： | CN102276707A | 公开（公告）日： | 2011-12-14 |
| 发明（设计）人： | 林影;周新莹;张莉;叶燕锐;韩双艳;郑穗平 | 申请（专利权）人： | 华南理工大学 |
| 主分类号： | C07K14/39 | 分类号： | C07K14/39;C12N15/31;C12N1/19;C12N15/81;C12R1/84 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 何淑珍 |
| 地址： | 510640 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 酵母 蛋白 gcw19 及其 表面 展示 系统 构建 方法 | ||
1.一种巴斯德毕赤酵母壁蛋白Gcw19，其特征在于，该蛋白的氨基酸序列如SEQ NO：1所示。
2.编码权利要求1所述巴斯德毕赤酵母壁蛋白GCW19的基因，其特征在于，核苷酸序列如SEQ NO：4所示。
3.一种巴斯德毕赤酵母细胞表面展示系统，其特征在于，是以权利要求1所述的巴斯德毕赤酵母壁蛋白Gcw19为锚定蛋白，将靶蛋白固定在巴斯德毕赤酵母细胞表面构成的。
4.权利要求3所述的巴斯德毕赤酵母表面展示系统的构建方法，该方法由以下步骤组成：
（1）将权利要求2所述的基因克隆到表达载体的表达盒中，得到以权利要求1所述巴斯德毕赤酵母壁蛋白为锚定蛋白的表面展示表达载体；
（2）将靶蛋白的基因序列克隆到所述表面展示表达载体的巴斯德毕赤酵母壁蛋白基因序列的上游，与所述巴斯德毕赤酵母壁蛋白基因形成融合基因；
（3）转化巴斯德毕赤酵母，根据所述表达载体上的筛选标记筛选阳性转化子，即得到表面展示系统。
5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述表达载体包括带有分泌信号肽序列的巴斯德毕赤酵母表达载体。
6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述表达载体为pPIC9K、pPICZαA、pPICZαB、pPICZαC、pGAPZαA、pGAPZαB或pGAPZαC。
7.根据权利要求4～6之一所述的构建方法，其特征在于，所述靶蛋白为碱性木聚糖酶、米黑根毛霉脂肪酶或南极假丝酵母脂肪酶B。
8.根据权利要求4～6之一所述的构建方法，其特征在于，所述巴斯德毕赤酵母为巴斯德毕赤酵母GS115。
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