[发明专利]一种用于生产大菱鲆免疫球蛋白的方法无效
| 申请号： | 201110216441.1 | 申请日： | 2011-07-30 |
| 公开（公告）号： | CN102268088A | 公开（公告）日： | 2011-12-07 |
| 发明（设计）人： | 王蔚芳;李青梅;甘玲玲;张改平;雷霁霖 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院黄海水产研究所 |
| 主分类号： | C07K16/18 | 分类号： | C07K16/18 |
| 代理公司： | 青岛海昊知识产权事务所有限公司 37201 | 代理人： | 张中南 |
| 地址： | 266100 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 生产 大菱鲆 免疫球蛋白 方法 | ||
1.一种用于生产大菱鲆免疫球蛋白的方法，其特征在于是利用牛血清白蛋白BSA作为抗原来免疫大菱鲆。
2.权利要求1所述的生产大菱鲆免疫球蛋白的方法，其特征在于包括如下步骤：
1)第一次免疫：将BSA与弗氏完全佐剂等比例混匀乳化制成疫苗，以0.5ml/kg鱼体重量注入健康大菱鲆；
2)第二次免疫：第一次免疫14天后将BSA与弗氏不完全佐剂等比例混匀乳化制成疫苗，以0.5mL/kg鱼体重量注入第一次免疫的大菱鲆；
3)第三次免疫：第二次免疫14天后将BSA与弗氏不完全佐剂等比例混匀乳化制成疫苗，以0.5mL/kg鱼体重量注入第一次免疫的大菱鲆完成免疫；在从第一次免疫起1～10周内通过亲和层析的方法获得大菱鲆抗BSA的免疫球蛋白。
3.如权利要求2所述的生产大菱鲆免疫球蛋白的方法，其特征在于是从第一次免疫起8～10周内通过亲和层析的方法获得大菱鲆抗BSA的免疫球蛋白。
4.如权利要求2所述的生产大菱鲆免疫球蛋白的方法，其特征在于所述的亲和层析的方法是将BSA-琼脂糖装入10×0.5cm层析柱中，以0.01mol/L磷酸盐缓冲液预洗后，将大菱鲆免疫血清与等体积磷酸盐缓冲液混合，过滤后上层析柱，PBS洗涤后；用10ml洗脱液将大菱鲆抗BSA的免疫球蛋白洗脱下来并作为单一组分收集；立即用1.2ml 0.1mol/L Tris-HCl中和；置0.01mol/L磷酸缓冲液中4℃透析获得大菱鲆免疫球蛋白。
5.如权利要求4所述的生产大菱鲆免疫球蛋白的方法，其特征在于所述的洗脱液为含0.15mol/L NaCl的0.1mol/L甘氨酸-NaOH溶液，洗脱液pH值为11.0。
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