[发明专利]一种制备DL2000 DNA分子量标准的方法及其产品和应用

说明书

技术领域

本发明属于生物工程领域，特别涉及一种制备DL2000DNA分子量标准的方法及其产品和应用。 

背景技术

DNA分子量标准俗称DNA Marker，是由一系列已知长度的DNA片段混合而成，是分子生物学实验中最常用的一种试剂。通过将实验中所得的DNA片段与DNA Marker在同一块琼脂糖凝胶中进行电泳，通过将样品片段与DNA Marker比较，就可以大致估计出实验所得的DNA片段的大小。 

DNA Marker的各条带通常有两种制备方案：PCR扩增和酶切质粒。 

PCR扩增的方案就是设计多套PCR引物进行扩增，得到相应大小的DNA片段。然后再对各片段进行纯化，定量。最后按比例将各片段混合，就得到了所需的产品。PCR扩增法制备DNA Marker存在着较大的缺陷，一是扩增的体积会有一定的限制。现在的PCR仪每个孔最多扩增体积不会超过70微升，以一台PCR仪96孔为例，最多一次可以扩增7毫升。更大的量就需要增加PCR仪及进行多次扩增。二是PCR扩增受多种条件影响较大，如仪器，模板，扩增用酶，不同批次的引物，及其他试剂，因此不同扩增批次之间差异会较大。三是PCR扩增的成功率相对较低，有较多的时间所扩增的条带可能有杂带，或目标条带专一性不太强，所扩增的条带较宽，或扩增产率较低，以及其他的不成功情况。 

常规质粒酶切的方法，由于DNA的条带亮度与其大小有正比例关系，在一个质粒中各片段酶切后其亮度可能会有较大差异，大片段比小片段亮。因此会导致所制备的终产品各条带之间亮度不均匀。 

DNA分子量标准是分子生物学实验室中最常用的一种试剂，而且属于消耗型的产品，市场用量很大。而DL2000类型的DNA分子量标准，由100bp，250bp，500bp，750bp(加亮作为指示带)，1kb，2kb共6条DNA片段组成。它是实验室中用得最方便，也是使用最多的一种产品，消耗量很大。许多公司都有类似的产品出售。由于该DNA分子量标准中包含了小片段DNA，许多公司均采用PCR的方案进行产品制备。由于PCR生产中需要消耗大量人力资源及PCR仪，而且像100bp这种很小的DNA片段采用PCR扩增的方案效率特别低，扩增后的每个条带均需要进行纯化，并定量。然后再逐条带进行配制调整，得到最终产物。因而PCR扩增中不同批次之间会存在较大差别，并且很耗费人力及试剂，生产流程难于标准化。 

发明内容

本发明针对现有的DL2000DNA分子量标准的制备方法过程烦琐，批次之间质量不稳定，难以大规模生产的不足，提供一种新的制备DL2000类型的DNA分子量标准的方法及其产品和应用，其生产方便，可大规模生产，各批次之间质量稳定，DL2000 DNA分子量标准的各条件亮度均一。 

本发明通过下述技术方案解决了上述问题： 

本发明的第一技术方案是：一种制备DL2000 DNA分子量标准的方法，采用质粒酶切法，包括以下步骤：(1)DL2000 DNA分子量标准包括6个DNA片段：100bp，250bp，500bp，750bp，1kb，2kb，将该6个片段分配到两个载体中进行扩增，并且使它们在载体中具有特定的拷贝数，其中该6个片段的分配和拷贝数具体如下：载体1中包含片段100bp，拷贝数10；片段250bp，拷贝数4；片段500bp，拷贝数2；片段750bp，拷贝数1；和片段1kb，拷贝数1；载体2中包含2kb，拷贝数1；和片段750bp，拷贝数4；(2)将载体1和载体2用限制性内切酶进行酶切，然后混合，即得。