[发明专利]检测肺癌蛋白的质谱模型及构建方法

说明书

技术领域

本发明涉及恶性肿瘤检测领域，为一种全新的非入侵性检测方法，在体外对肺癌进行早期的发现和检测。

背景技术

肺癌在近年来已逐步代替肝癌成为我国恶性肿瘤的首位死亡原因，占全部恶性肿瘤死亡人数的22.7％，并且肺癌的发病率和死亡率仍在继续上升。根据卫生部全国肿瘤防治办公室提供的资料显示，自2000～2005年间，中国肺癌的发患者数估计增加12万人。其中，男性肺癌患者从2000年的26万人增加到2005年的33万人，同期女性肺癌患者从12万人增加到17万人。目前我国肺癌发病率每年增长26.9％，如不及时采取有效控制措施，预计到2025年，我国肺癌患者将达到100万，成为“世界第一”肺癌大国。

肺癌的早期诊断有利于帮助患者早期进行治疗，早期开展治疗的肺癌预后效果好，不容易复发。肺癌的症状主要有咳嗽、咯血、胸痛、呼吸困难以及肿瘤引起的阻塞、压迫和肿瘤转移表现的各种症状，其症状有轻有重，早期不易引起人们注意。临床医师对中年以上久咳不愈或出现血痰以及肺部X线检查发现性质未明的块影或炎变的病例提高警惕，高度怀疑肺癌的可能性，及时进行周密检查。我们应用基于质谱的蛋白质组学技术提供一种可用于早期诊断的方法。

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)是近年来发展起来的一种新型的软电离生物质谱，其原理是用激光照射样品与基质形成的共结晶薄膜，基质从激光中吸收能量传递给生物分子，而电离过程中将质子转移到生物分子或从生物分子得到质子，而使生物分子电离的过程。TOF的原理是离子在电场作用下加速飞过飞行管道，根据到达检测器的飞行时间不同而被检测即测定离子的质荷比(M/Z)与离子的飞行时间成正比，检测离子。尽管MALDI-TOF的准确度高达0.1％～0.01％，远远高于目前常规应用的SDS电泳与高效凝胶色谱技术，但在肿瘤标志物尤其是肺癌标志物的应用中仍然存在一些缺陷，因此国内迄今为止尚无采用MALDI-TOF-MS技术获得检测肺癌标志物或肺癌血清特征蛋白的报道。

发明内容

本发明目的是为了克服已有对肺癌标志物或肺癌血清特征蛋白检测技术的不足之处，提出一种用于检测肺癌血清特征蛋白的质谱模型及其制备方法。

本发明的第一个目的是提供一种用于检测肺癌特征蛋白的质谱标记，该质谱标记是质荷比为4054m/z、2273m/z、4091m/z、3955m/z、3192m/z、3884m/z、5337m/z的峰。

本发明的第二个发明目是提供一种用于检测肺癌特征蛋白的质谱模型，该质谱模型包括质荷比为4054m/z、2273m/z、4091m/z、3955m/z、3192m/z、3884m/z和5337m/z的峰，模型中表征为4054m/z、2273m/z、4091m/z、3955m/z、3192m/z、3884m/z和5337m/z的蛋白是肺癌血清特征蛋白，其中4054m/z、2273m/z、4091m/z、3955m/z、3192m/z特征蛋白的表达都下调，3884m/z、5337m/z的表达都上调时，预示为肺癌患者或潜在患者。所述的4054m/z、2273m/z、4091m/z、3955m/z和3192m/z特征蛋白的下调表达的临界值分别为141.88±57.55、37.13±8.15、189.43±61.91、130.06±110.44和78.65±23.6。所述的3884m/z、5337m/z特征蛋白的上调表达的临界值分别为20.79±5.78和214.54±93.79。

其中，所述的表征为质荷比为4054m/z、2273m/z、4091m/z、3955m/z、3192m/z、3884m/z和5337m/z的多肽的氨基酸序列分别如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5、SEQ ID No.6和SEQ ID No.7所示。

在一个具体实施方案中，所述的质谱模型的构建方法，包括：

1)收集多例临床确诊的肺癌患者血清和正常对照人员的血清作为两组血清标本，进行低温冷冻备用；

2)对血清蛋白进行质谱前预处理；

3)对预处理过的两组血清蛋白进行质谱检测读取，获得两组血清多肽的指纹图谱；

4)对所有的肺癌患者和正常人血清多肽的指纹图谱进行标准化处理，并收集数据；