[发明专利]一种含HIPK2基因的重组质粒用于制备抗肿瘤药物的用途

权利要求书

1.一种含HIPK2基因的重组质粒用于制备抗肿瘤药物的用途。

2.如权利要求1所述的含HIPK2基因的重组质粒用于制备抗肿瘤药物的用途，其特征在于，该重组质粒包含HIPK2基因的编码序列以及载体质粒DNA序列，所述的载体质粒DNA序列中包含与HIPK2基因连接的调节序列；所述的重组质粒通过以下步骤构建：

步骤1，以含有人HIPK2基因的真核表达载体pENTR223.1/HIPK2为模板设计引物序列，分别引入Nhe I和Kpn I酶切位点；

步骤2，对HIPK2基因进行PCR扩增；

步骤3，对所得HIPK2基因序列和载体质粒进行Nhe I和Kpn I双酶切以及纯化；

步骤4，将步骤3所得产物进行T₄ DNA连接酶酶切，使HIPK2基因目的片段和载体质粒相连接； 

步骤5，用步骤4所得连接产物转化大肠杆菌感受态细胞；

步骤6，将步骤5所得重组质粒进行酶切鉴定阳性克隆并测序。

3.如权利要求1或2所述的含HIPK2基因的重组质粒用于制备抗肿瘤药物的用途，其特征在于，该重组质粒的应用包含以下步骤：

步骤1），HIPK2基因重组质粒转染人肿瘤细胞；

步骤2），HIPK2基因重组质粒在人肿瘤细胞中功能活性的鉴定；

步骤3），通过体外实验研究HIPK2基因重组质粒在人肿瘤细胞血管新生、增殖凋亡、侵袭转移中的作用；

步骤4）开发基于HIPK2基因的抗肿瘤药物。

4.4．如权利要求3所述的含HIPK2基因的重组质粒用于制备抗肿瘤药物的用途，其特征在于，所述的HIPK2基因重组质粒转染的人肿瘤细胞，包含所有瞬时和稳定转染HIPK2基因重组质粒的人肿瘤细胞。

5.如权利要求4所述的含HIPK2基因的重组质粒用于制备抗肿瘤药物的用途，其特征在于，所述的HIPK2基因重组质粒转染的人肿瘤细胞，包含肝癌、胃癌、结直肠癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌和肺癌癌细胞。

6.如权利要求5所述的含HIPK2基因的重组质粒用于制备抗肿瘤药物的用途，其特征在于，所述的HIPK2基因重组质粒转染的人肿瘤细胞，是指消化系恶性肿瘤细胞。

7.如权利要求3所述的含HIPK2基因的重组质粒用于制备抗肿瘤药物的用途，其特征在于，步骤4）中所述的基于HIPK2基因的抗肿瘤药物，其制剂形式包含注射液、喷涂剂、冻干剂。

8.如权利要求3所述的含HIPK2基因的重组质粒用于制备抗肿瘤药物的用途，其特征在于，步骤4）中所述的基于HIPK2基因的抗肿瘤药物，其给药途径包含静脉注射、肌肉注射、皮下注射、介入给药和直接瘤内注射。