[发明专利]一种糙苏素的提纯方法

说明书

技术领域

本发明属于天然产物分离领域，涉及一种糙苏素的提纯方法，尤其是涉及一种采用高速逆流色谱法纯化糙苏素的方法。

背景技术

螃蟹甲为唇形科糙苏属多年生草本植物螃蟹甲Phlom is younghusband ii M ukerjee.的干燥块根，为藏医习用药材，藏药名为“露木尔”，主要分布于西藏、青海等省区。其味苦性凉，具有疏风清热、散寒润喉、止咳化痰、生肌敛疮等功效，用于治疗培根寒症、咽喉疫疬、风热感冒、咳嗽痰多、支气管炎、疮疡久溃不敛、肺病等症，现收载于卫生部药品标准藏药第一册(1995版)。目前对螃蟹甲的化学成分研究较少，有文献报道从中分离得到二萜苷、环烯醚萜苷、蒽醌、黄酮和挥发油类等成分。

糙苏素：白色粉末，C₁₇H₂₆O₁₃，mp.156～158℃。

糙苏素为螃蟹甲中的一种环烯醚萜类成分，现代药理研究表明，植物中许多环烯醚萜苷类化合物有抗炎、抗肿瘤、抗氧化和抗菌等活性。谢文利等发表的文献“糙苏素的抗肿瘤活性研究”，该文献表明糙苏素对体外培养的人肿瘤细胞和接种的小鼠肿瘤具有明显抑制作用，能够增强淋巴细胞增殖功能和NK细胞的杀伤能力，具有抗肿瘤和免疫调节功能。

目前，尚未见采用高速逆流色谱法纯化糙苏素的报道，同时未见有相关制备色谱技术用于制备高纯度糙苏素的报道，也未见有相关专利。

目前，国内外多采用柱色谱法和重结晶等传统分离制备方法分离植物中的有效单体，费时费力、污染环境，而且所用固定相对样品有不可逆吸附等缺点。高速逆流色谱(HSCCC)是一种较新的液液分配色谱技术，它不用任何固体支撑或载体而克服了传统分离方法对样品的不可逆吸附作用，因而样品回收率高，同时还具有应用范围广、仪器操作简单、分离量大等优点，因此被广泛应用于天然产物分离制备当中。

发明内容

本发明的目的在于提供一种糙苏素的提纯方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种糙苏素的提纯方法，其特征在于：以螃蟹甲药材为原料，加入50～70％乙醇提取2～4次，提取液减压回收乙醇得浓缩液，浓缩液过大孔树脂柱，先用水洗脱杂质，再用30～50％乙醇液洗脱，醇洗脱液浓缩干燥后采用高速逆流色谱法分离纯化，得糙苏素产品。

所述大孔树脂柱径高比为1∶5～1∶7，吸附流速控制在2～5L/h。

所述高速逆流色谱法分离纯化，它包括配置高速逆流色谱固定相、流动相的溶剂系统，使逆流色谱仪柱子中充满固定相，然后调整主机转速为800～1000rmp，再以1～3ml/min流速泵入流动相，待柱内溶剂系统建立动态平衡后，由进样阀进样，然后根据检测器谱图接收目标流分。

所述高速逆流色谱固定相、流动相的溶剂系统为乙酸乙酯-正丁醇-水(3～6∶2～5∶4～9)，配置方法为，将乙酸乙酯-正丁醇-水按上述比例量取混合，超声摇匀，静置分层后分离，下相为流动相，上相为固定相，样品用下相溶解。

本发明是采用高速逆流色谱技术对中药粗提物进行分离纯化，简便、快速，同时避免了样品损失。克服了传统制备方法操作繁琐、分离周期长等缺点，并有制备量大、分离效率高、产品纯度好等优点。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1：

取螃蟹甲药材1kg，加入50％乙醇提取2次，提取液减压回收乙醇得浓缩液，浓缩液过大孔树脂柱(径高比1∶5)吸附，吸附流速控制为2L/h，先用水洗脱杂质，再用30％乙醇液洗脱，收集醇洗脱液浓缩干燥得干燥物；

将乙酸乙酯-正丁醇-水按3∶3∶5体积比取混合，超声摇匀，静置分层后分离，下相为流动相，上相为固定相，干燥物用下相溶解，将固定相泵满色谱柱，然后调整主机转速为800rmp，再以3ml/min流速泵入流动相，待柱内溶剂系统建立动态平衡后，由进样阀进样，然后根据检测器谱图接收目标流分，蒸干即得糙苏素产品，含量97.1％。

实施例2：

取螃蟹甲药材5kg，加入70％乙醇提取4次，提取液减压回收乙醇得浓缩液，浓缩液过大孔树脂柱(径高比1∶7)吸附，吸附流速控制为5L/h，先用水洗脱杂质，再用50％乙醇液洗脱，收集醇洗脱液浓缩干燥得干燥物；