[发明专利]一种重组腺病毒制剂的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种重组腺病毒制剂的制备方法，特别是涉及一种重组腺病毒制剂的制备方法。

背景技术

腺病毒因其对人致病性小且不诱导癌变，宿主细胞广，繁殖滴度高，装载容量大，而成为近年来病毒载体研究热点。但是即便是含有稳定剂的液体重组腺病毒制剂对温度也较为敏感，给运输、保存带来较大困难，这在很大程度上限制了其在临床上的应用。到目前为止，尚未有能在4～8℃长期保存的冻干重组腺病毒制剂上市。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于解决现有重组腺病毒制剂的稳定性，提供一种安全、高效、稳定性好、有效期长的冷冻干燥重组腺病毒制剂。

一种重组腺病毒制剂的制备方法，包括重组腺病毒原液及冷冻干燥添加剂，所述冷冻干燥添加剂基本上由人血白蛋白和羟乙基淀粉组成。为了更好地维持和保护原液生物的活性，所述冷冻干燥添加剂中还含有海藻糖、甘氨酸、精氨酸。所述冷冻干燥添加剂各组分的重量体积比为：

所述的重组腺病毒原液与所述冷冻干燥添加剂的比例是重组腺病毒原液∶冷冻干燥添加剂＝1∶(0.8～1.2)。

一种生产重组腺病毒制剂的方法，包括以下步骤：

(1)配制添加剂按上述添加剂配方，称取各组分，溶于600毫升蒸馏水中，加入20％人血白蛋白，过滤，115℃消毒40分钟；

(2)将第(1)溶液，用10％无菌磷酸氢二钠调节溶液的pH值至7.0±0.1，补加蒸馏水至1000毫升，混匀；

(3)配制冻干制剂液：将重组腺病毒按内含腺病毒量1.0×10¹²颗粒数/ml的浓度以1∶(0.8～1.2)加入到上述溶液(2)中，无菌过滤，注入西林瓶中，半加塞；

(4)预冻：将分装好的冻干制剂液放入冷冻干燥工作箱内，预置降温程序，分别在5℃、0℃、-6℃各平衡1小时，启动快速冻结程序，将物料温度降至-30℃～-40℃，维持3～5小时；

(5)真空干燥：启动真空工作程序，待冷冻干燥器内相对压力降至5Pa，预设升温程序，以每次升温15℃维持30分钟，持续减压升温至0～35℃并维持3小时；

(6)全部加塞，压封铝盖。

成品冻干制剂按《中华人民共和国药典》三部所列方法检定，合格。

用本发明配方及方法制备获得的重组腺病毒冻干制剂，经感染性滴度检测试验证明，制剂保持了重组腺病毒原有活性；并经30个月的稳定性试验证明稳定性良好。与现有技术相比，本发明工艺合理，安全性和稳定性好，有效期长，为采用重组腺病毒作为载体的基因治疗的临床实验提供良好的应用前景。

实施例1、

保护剂配方：羟乙基淀粉5.1g，精氨酸0.8g，甘氨酸0.1g，人血白蛋白2.5ml，海藻糖1.2g    

制备：

按配方将各组分混合，加纯水至100ml，再将重组腺病毒按内含腺病毒量1.0×10¹²颗粒数/ml的浓度以1∶0.8加入到上述保护剂中，混合均匀进行无菌过滤、灌装，采用真空冷冻干燥法，将制剂放入冷冻干燥箱，待冷冻干燥器内相对压力降至5Pa，预设升温程序，以每次升温15℃维持30分钟，持续减压升温至0～35℃并维持3小时即制成冷冻干燥重组腺病毒制剂。

实施例2

保护剂配方：羟乙基淀粉10.3g，精氨酸1.2g，甘氨酸0.08g，人血白蛋白3.1ml，海藻糖3.4g

制备：

按配方将各组分混合，加纯水至100ml，再将重组腺病毒按内含腺病毒量1.0×10¹²颗粒数/ml的浓度以1∶0.8加入到上述保护剂中，混合均匀进行无菌过滤、灌装，采用真空冷冻干燥法，将制剂放入冷冻干燥箱，待冷冻干燥器内相对压力降至5Pa，预设升温程序，以每次升温15℃维持30分钟，持续减压升温至0～35℃并维持3小时即制成冷冻干燥重组腺病毒制剂。

实施例3

保护剂配方：羟乙基淀粉19.8g，精氨酸1.7g，甘氨酸0.2g，人血白蛋白10ml，海藻糖5.9g

制备：

按配方将各组分混合，加纯水至100ml，再将重组腺病毒按内含腺病毒量1.0×10¹²颗粒数/ml的浓度以1∶1.1加入到上述保护剂中，混合均匀进行灌装，采用真空冷冻干燥法，将制剂放入冷冻干燥箱，待冷冻干燥器内相对压力降至5Pa，预设升温程序，以每次升温15℃维持30分钟，持续减压升温至0～35℃并维持3小时即制成冷冻干燥重组腺病毒制剂。