[发明专利]红叶石楠组织培养的快繁方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物技术领域的组织培养方法，具体是红叶石楠组织培养的快繁方法。

背景技术

红叶石楠(Photinia fraseri）属蔷薇科石楠属(Photinia)的杂交品种,为常绿小乔木或灌木，因其具有鲜红色的新梢和嫩叶而得名。红叶石楠作为珍贵的常绿彩叶树种用途广泛,作绿篱、绿墙、造型树、孤植效果均佳。另外它四季色彩丰富、生长速度快、萌芽性强、耐修剪,可根据园林需要进行多功能、多层次、立体式的应用。在国外特别是欧美和日本,被誉为“红叶绿篱之王”。

段祖安(2000)、黄新(2004)以冬季多年生枝条为外植体，研究不同浓度BA和NAA对茎段外植体的诱导。赵小梅（2005）等研究发现适宜的外植体为茎尖，不同外植体及不同种类培养基对增殖有影响，其最佳增殖培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+IBA 0.1 mg/L，黄美娟（2003）、陆颖伟（2006）、魏和平（2006）等分别以红叶石楠带腋芽茎段为外植体，筛选出最佳增殖培养基均为2.0 mg/L+ KT 0.5 mg/L +IBA0.2 mg/L，但彼此的增殖系数相差较大；Kane、M. E(1987)等做了红叶石楠的变异诱导和新品种选育的微繁程序应用研究，提出了最适宜的培养基和激素类型及浓度。Leifert, C(1992)等研究表明红叶石楠的组织培养有和其他种类植物不同的最适宜pH范围。Ramirez-Malagon, R（1997)等研究了BA和PG(根皮酚)对增殖培养的影响及IBA和PG对生根培养的影响，结果表明PG(根皮酚)对增殖培养促进作用不大，但IBA和PG的混合使用可促进根系的生长。Ezequiel(2007)等在红叶石楠组培生根研究中发现添加根际细菌能显著促进根的发育，对植株的生长有明显的促进作用；前人的研究主要采用常规植物生长调节剂6-BA、NAA、KT等，组合各不相同，试验重复性差，生根时间较长。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，对红叶石楠组织培养快速繁殖的方法进行优化。本发明的方法取材方便、可提供的材料充足，不定芽的诱导率最高可达100%，增殖速度较快，增殖系数可达7.1，生根率亦可达95%以上，移栽成活率可达80%以上；本发明具有很强的可实施性与重复性，为红叶石楠工厂化、规模化育苗奠定了良好的理论基础。

本发明是通过以下技术方案实现的，本发明的红叶石楠组织培养的快繁方法包括如

下步骤：

步骤一，取红叶石楠茎段，修剪为外植体，灭菌后诱导培养，得不定芽；

步骤二，将不定芽进行继代培养，之后进行增殖培养；

步骤三，将增殖培养后的不定芽进行生根培养，得到生根苗；

步骤四，将生根苗炼苗，移栽到消毒栽培基质中培养，获得红叶石楠再生植株。

优选地，步骤一中，所述灭菌具体为：取红叶石楠茎段，用水冲洗，放入饱和洗衣粉溶液中浸泡2～3min，再用水冲洗，用体积分数为70～75%的酒精浸泡25～30s，经无菌水冲洗，再用质量分数为0.10～0.15%的升汞溶液浸泡6～8min，再经无菌水冲洗。

优选地，步骤一中和步骤二中，诱导培养和继代培养所使用的培养基均为MS基本培养基，添加剂为：30g/L的蔗糖，7g/L的琼脂，植物生长素；培养条件均为：温度23～27℃，光照时间10h～20h/d，光照强度2000～3000lux；诱导培养的时间为5～7d；继代培养的时间为20～25d。

优选地，所述植物生长素的添加量为：1.0mg/L的6-BA，0.1mg/L的NAA。

优选地，步骤二中，所述增殖培养使用的培养基为MS基本培养基，添加剂为30g/L的蔗糖, 7g/L的琼脂，植物生长素；培养条件为：温度23～27℃，光照时间10h～20h/d，光照强度2000～3000lux；培养时间为28～33 d。

优选地，所述植物生长素的添加量为：0.05 mg/L的TDZ，0.2mg/L的ZT。

优选地，步骤三中，所述生根培养使用的培养基具体为1/2 MS基本培养基；添加剂为30g/L的蔗糖, 7g/L的琼脂；培养条件为：温度23～27℃，光照时间10h～20h/d，光照强度2000～3000lux；诱导时间为20～25 d。

优选地，所述植物生长素的添加量为1.0mg/LNAA。

优选地，所述栽培基质为将蛭石、珍珠岩、草炭的混合物。

优选地，所述栽培基质为将蛭石、珍珠岩、草炭按质量比为6：3：1混合得到的混合物。