[发明专利]用于检测沙眼衣原体主要外膜蛋白抗原的纳米金试纸及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及疾病的检测装置领域，特别涉及一种用于检测沙眼衣原体感染的试纸。

背景技术

沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis，Ct）具有独特的发育周期，有原体（Elementary Body）和网状体（Reticulate Body）两种形式。其独特的生命周期是原体感染细胞发育为网状体， 网状体再分裂为原体释放， 进而再次感染细胞的循环过程。 Ct是一种在人体内长期生存并又广泛传播的病原体，是我国性传播疾病（sexually transmitted diseases， STDs） 的主要病原之一，它在一定条件下能引起异位妊娠、 早产、 流产及尿道感染等多种疾病。研究发现，Ct感染尚与许多自身免疫疾病发病有关，如衣原体感染后可引起反应性关节炎、Reiter综合征等。

A、B、C或Ba抗原型Ct感染还可导致一种致盲性慢性传染性结膜角膜炎，即沙眼。发展中国家常见，多发于儿童及少年时期，潜伏期为5～14天。病情发展后出现流泪、畏光、痒涩感、异物感、烧灼感和干燥感等症状，分泌物粘稠、结膜充血显著、乳头增生、滤泡形成或瘢痕形成。严重者可引起诸多后遗症与并发症，如睑内翻及倒睫、睑球粘连、实质性角结膜干燥症、慢性泪囊炎和角膜溃疡等，导致视力受损，反复发作最终致盲。典型的沙眼在临床上容易诊断，轻型早期病例则较困难，易与其他结膜病相混淆，需要借助特殊仪器及多年临床经验才能正确的诊断。实验室检查有助于确立沙眼的诊断，如结膜刮片后行Giemsa染色可见沙眼包涵体，或用荧光抗体染色、酶联免疫测定、聚合酶链反应等方法检测到沙眼衣原体抗原等。但这些方法需要特殊仪器和专业人员，且操作复杂、耗时，费用昂贵，不能满足准确、灵敏、快速、经济的检查要求。

Ct主要外膜蛋白（major outer membrane protein, MOMP）具有5个保守区和4个可变区。由于其保守结构和好的免疫原性，MOMP是检测Ct的最理想的抗原之一。目前市面上只有检测Ct MOMP的ELISA试剂盒出售，未见有检测Ct MOMP的纳米金快速检测试纸报道。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种纳米金试纸，该试纸可用于检测沙眼衣原体MOMP抗原。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

由底板、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫组成，硝酸纤维素膜上有检测线和质控线，所述硝酸纤维素膜上的检测线由浓度大于或等于1mg/mL的抗体Ⅱ包被而成，质控线由浓度大于或等于1.5mg/mL的羊抗鼠IgG多克隆抗体包被而成；所述结合垫由浓度大于或等于6μg/mL抗体Ⅰ包被而成,所述抗体Ⅱ为沙眼衣原体检测沙眼衣原体抗原鼠抗人单克隆抗体IgG，所述抗体Ⅰ为纳米金标记的沙眼衣原体检测沙眼衣原体抗原鼠抗人单克隆抗体IgG,所述抗体Ⅰ和所述抗体Ⅱ的效价均为1:200000。

本发明的目的之二在于提供一种用于检测沙眼衣原体MOMP抗原的纳米金试纸的制备方法，该方法操作简单，适用于大规模应用。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

所述的纳米金试纸的制备方法，具体步骤为：

a 硝酸纤维素膜和结合垫的处理

将浓度大于或等于1mg/mL的抗体Ⅱ喷点于硝酸纤维素膜上形成检测线，将浓度大于或等于1.5mg/mL的羊抗鼠IgG多克隆抗体喷点于硝酸纤维素膜上形成质控线，干燥后得含有检测线和质控线的硝酸纤维素膜；将玻璃纤维素膜浸于浓度大于或等于6μg/mL的抗体Ⅰ中，干燥后得结合垫；

b 纳米金免疫层析试纸的组装

分别将样品垫、结合垫、含有检测线和质控线的硝酸纤维素膜和吸收垫依次粘在所述底板上，得用于检测沙眼衣原体检测沙眼衣原体抗原的纳米金试纸，所述硝酸纤维素膜上所述质控线靠近吸收垫端，所述检测线靠近结合垫端。

所述的纳米金试纸的制备方法，所述检测线与质控线的距离为0.8厘米，所述检测线与质控线距硝酸纤维素膜的边距分别为0.85厘米。

所述的纳米金试纸的制备方法，步骤a中, 将浓度为1mg/mL的抗体Ⅱ喷点于硝酸纤维素膜上形成检测线，将浓度为1.5mg/mL的羊抗鼠多克隆抗体喷点于硝酸纤维素膜上形成质控线，并在37℃干燥1小时，得含有检测线和质控线的硝酸纤维素膜。

所述的纳米金试纸的制备方法，步骤a中，将玻璃纤维素膜浸于浓度大于或等于6μg/mL的抗体Ⅰ中，并在37℃干燥4小时后得结合垫。

本发明的目的之三在于提供一种所述的纳米金试纸的新应用，该应用为检测沙眼衣原体MOMP抗原提供了新的途径。