[发明专利]检测多种细菌耐药基因的技术和检测试剂盒

说明书

技术领域：

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种利用锁定核酸荧光PCR法检测多种细菌耐药基因的技术和检测试剂盒。 

背景技术：

抗生素是医院临床中应用最广泛的抗菌药物，在控制、预防和治疗各种感染性疾病中发挥重要作用。然而，随着抗菌药物的广泛使用，病原菌对常见抗菌药物的耐药性不断增加，耐药菌感染的治疗已成为一个全球性难题。 

各种耐药菌的不断出现可造成严重后果，导致手术治疗失败、并发症增多、感染复发、住院时间延长、昂贵抗生素及其它药物的使用量增加等。耐药菌还随着国际贸易及旅游业的高速发展而在全球范围蔓延。了解耐药性细菌的出现原因、发生机制，掌握并使用正确的检测方法是及时发现耐药菌株、有效预防和控制耐药性细菌扩散的关键。 

目前细菌耐药性检测主要是通过基于培养的药物敏感性实验，包括纸片扩散法、最小抑菌浓度(MIC)法等。其中MIC法属于金标准，可以表明细菌对药物的敏感性，从而指导临床治疗。由于上述药物敏感性实验是基于培养的，因此耗时较长，约2-3天才能获得结果，而且灵敏度较差，因此，临床亟需快速灵敏的实验方法来检测细菌耐药性，指导临床治疗方案，控制耐药细菌的传播和扩散。 

发明内容：

本发明的目的是提供一种检测多种细菌耐药基因的技术和检测试剂盒，它具有检测快速准确，灵敏度好，并且试剂盒的保存时期长的特点。 

为了解决背景技术所存在的问题，本发明采取以下技术方案：多细菌耐药基因的技术检测方法为：利用特异引物对进行实时荧光PCR，扩增待测细菌耐药基因，扩增的产物与锁定核酸探针进行杂交，检测荧光信号，确定待测细菌耐药基因。 

所述特异引物对中的两条正反向引物浓度相同。 

所述的与扩增产物杂交的锁定核酸探针的浓度与正反向引物浓度为1∶2。 

所述的PCR扩增温度循环包括40个温度循环，由变性、退火和延伸三个步骤组成。 

所述延伸温度为60-80℃。 

本发明的检测试剂盒包含扩增细菌特异基因及耐药基因的正反向引物对，与细菌特异基因及耐药基因的扩增产物杂交的锁定核酸探针和进行PCR反应和分子杂交的反应液。 

本发明具有以下有益效果：它具有检测快速准确，灵敏度好，并且试剂盒的保存时期长的特点。 

附图说明：

图1本发明中检测细菌耐药基因试剂盒包括的引物的结构示意图； 

图2本发明中检测细菌耐药基因试剂盒包括的锁定核酸探针的结构示意图； 

图3为本发明中多重不对称PCR扩增热循环程序的结构示意图； 

图4为本实施例中金黄色葡萄球菌ATCC 43300耐药基因扩增曲线图。 

具体实施方式：

参照图1-3，本具体实施方式采取以下技术方案：多细菌耐药基因的技术检测方法为：利用特异引物进行实时荧光PCR，扩增待测细菌耐药基因，扩增的产物与锁定核酸探针进行杂交，检测荧光信号，确定待测细菌耐药基因。 

所述特异引物对中的两条正反向引物浓度相同。 

所述的与扩增产物杂交的锁定核酸探针的浓度与正反向引物浓度为1∶2。 

所述的PCR扩增温度循环包括40个温度循环，由变性、退火和延伸三个步骤组成。 

所述延伸温度为60-80℃。 

本发明的检测试剂盒包含扩增细菌特异基因及耐药基因的正反向引物对，与细菌特异基因及耐药基因的扩增产物杂交的锁定核酸探针和进行PCR反应和分子杂交的反应液。 

本具体实施方式具有检测快速准确，灵敏度好，并且试剂盒的保存时期长的特点。