[发明专利]一种左卡尼汀中右旋异构体的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及药物分析领域中的一种左卡尼汀中右旋异构体的检测方法。

背景技术

左卡尼汀(carnitine)，又名左旋肉碱，于1905年由两位俄国科学家在肌肉提 取物中首次被发现，其分子结构式为3-羟基-4-氮-三甲氨基丁酸。左卡尼汀是一 种广泛存在于机体组织内的特殊氨基酸，为脂肪酸代谢的必需辅助因子，能促 进脂肪酸经B-氧化进入三羧酸循环，产生能量，与机体的器官、组织代谢密切 相关。左卡尼汀的缺乏会导致能量供应障碍及脂肪酸代谢的各种中间产物累积 酸中毒，出现心肌病变、心律失常、机体疲劳等症状。左卡尼汀有两种光学异 构体，即左旋体和右旋体，但仅左旋体具有生物活性，右旋体不具有任何活性。 为保证药品的质量及其安全性，需建立检测方法对右旋体的含量进行控制。目 前，关于左卡尼汀右旋异构体的检测方法，未见相关报道。因此，研制开发一 种左卡尼汀中右旋异构体的检测方法一直是亟待解决的新课题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种左卡尼汀中右旋异构体的检测方法，该方法采 用衍生化试剂右旋的芴甲氧羰酰氯，与左卡尼汀中的右旋异构体形成荧光化合 物，然后采用HPLC(荧光检测器、梯度淋洗法)进行检测，通过该方法检测左卡 尼汀中右旋异构体，重现性、灵敏度、准确度均能符合要求。

本发明的目的是这样实现的：一种左卡尼汀中右旋异构体的检测方法，该 检测方法包括如下步骤：

(1)色谱条件：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的C18柱，粒径5μm；

检测波长：激发光波长λex＝260nm，荧光波长λem＝315nm；

流动相：四正丁基氢氧化铵-甲醇和乙腈-水；

(2)四正丁基氢氧化铵溶剂的制备：

吸取24.4ml的55％的四正丁基氢氧化铵试剂，用水稀释至1000ml，摇匀， 用磷酸调节pH至7.0；

(3)芴甲氧羰酰氯试剂的制备：

吸取1.0ml的0.5％芴甲氧羰酰氯试剂，加3ml的丙酮，混匀；

(4)系统适用性溶液的制备：

称取混旋左卡尼汀对照品10mg，用四正丁基氢氧化铵溶剂溶解并稀释至 50ml，摇匀；

(5)供试品溶液的制备：

称取供试品约10mg，用四正丁基氢氧化铵溶剂溶解并稀释至50ml，摇匀；

(6)衍生反应：

分别吸取供试品溶液、系统适用性溶液各0.1ml于容器中，再分别加0.4ml 芴甲氧羰酰氯试剂，置于80℃热反应器中，放置20分钟，取出冷却至室温，分 别加入8ml的四正丁基氢氧化铵-甲醇流动相；

(7)测定方法：

取系统适用性溶液的衍生反应液5μl注入液相色谱仪，重复6次，记录图 谱，左旋左卡尼汀保留时间为17.8分钟，右旋左卡尼汀保留时间为14.5分钟， 左旋左卡尼汀、右旋左卡尼汀的相对标准偏差均应≤2.0％，取供试液的衍生反 应液5μl注入液相色谱仪，记录图谱，分别计算供试液中左旋左卡尼汀的峰面 积和右旋左卡尼汀的峰面积；

一种左卡尼汀中右旋异构体的检测方法，所述四正丁基氢氧化铵-甲醇流 动相中的四正丁基氢氧化铵溶液的配制方法为，精密吸取2.4ml的55％的四正丁 基氢氧化铵试剂，置于1000ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀；所述流动相 四正丁基氢氧化铵-甲醇配比为60∶40，pH值为3.0；所述流动相乙腈-水的配比 为65∶35，pH值为3.0；所述检测方法采用流动相四正丁基氢氧化铵-甲醇和乙 腈-水浓度、流速梯度淋洗法；所述浓度、流速梯度淋洗法为如下步骤，洗脱开 始后0-30分钟，四正丁基氢氧化铵-甲醇作为流动相，流速为0.75ml/分；洗脱 开始后31-49分钟，乙腈-水作为流动相，流速为1.5ml/分；洗脱开始后50-55 分钟，四正丁基氢氧化铵-甲醇作为流动相，流速为0.75ml/分。

本发明的要点在于它的检测方法，该方法采用衍生化试剂右旋的芴甲氧羰 酰氯，与左卡尼汀中的右旋异构体形成荧光化合物，然后采用HPLC(荧光检测器、 梯度淋洗法)进行检测。

一种左卡尼汀中右旋异构体的检测方法与现有技术相比，通过该方法检测 左卡尼汀中右旋异构体，重现性、灵敏度、准确度均能符合要求等优点，将广 泛的应用于药物分析领域中。

具体实施方式