[发明专利]一种柠檬酸发酵清液的分析方法

权利要求书

1.一种柠檬酸发酵清液的分析方法，所述柠檬酸发酵清液含有柠檬酸和糖，所述糖含有单糖和/或寡糖，其特征在于，所述方法包括使用色谱柱，所述色谱柱包括串联的反相色谱分离柱和离子排斥色谱柱；在色谱分离条件下，将所述柠檬酸发酵清液和流动相的混合液从反相色谱分离柱的上端引入，依次与反相色谱分离柱和离子排斥色谱柱接触，并连续用淋洗剂洗脱所述反相色谱分离柱和离子排斥色谱柱，将流出液A从离子排斥色谱柱的下端引出，所述流动相的组成和色谱分离的条件使得糖中的各组分以及柠檬酸先后被分离出来，并经色谱分析后得到保留时间和积峰面积，通过与同等条件下得到的标准谱图对比得到柠檬酸发酵清液中糖的组成和糖中的各组分含量以及发酵清液中柠檬酸的含量；所述淋洗剂和流动相的组成相同。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述柠檬酸发酵清液与流动相的体积比为1∶5-20。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述流动相为有机溶剂和缓冲液的混合液；以所述流动相的总体积为基准，所述有机溶剂的含量为1-10体积％；所述缓冲液的含量为90-99体积％。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述有机溶剂选自乙腈、乙醇和异丙醇中的一种或多种；所述缓冲液为酸性水溶液，所述酸性水溶液中的酸选自硫酸、盐酸和磷酸中的一种或多种；所述缓冲液的浓度为0.001-0.02mol/L。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述缓冲液的pH值为1.5-3。

6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述色谱分离的条件包括：所述柠檬酸发酵清液和流动相的混合液与所述反相色谱柱中填料的体积比为1∶130-4000；所述柠檬酸发酵清液和流动相的混合液与离子排斥色谱柱中填料的体积比为1∶400-14000；色谱分离的温度为20-80℃；所述淋洗剂的流速为0.1-1.5mL/min。

7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述柠檬酸发酵清液和流动相的混合液与所述反相色谱柱中填料的体积比为1∶200-400；所述柠檬酸发酵清液和流动相的混合液与离子排斥色谱柱中填料的体积比为1∶700-1400；所述色谱分离的温度为20-60℃；所述淋洗剂的流速为0.4-0.7mL/min。

8.根据权利要求1所述的方法，其中，所述反相色谱柱的填料以二氧化硅为基体，在二氧化硅表面键合的官能团选自C4烷基、C8烷基和C18烷基中的一种；所述离子排斥色谱柱的填料为聚苯乙烯与二乙烯基苯共聚物，交换基团为-SO₃H。

9.根据权利要求1所述的方法，其中，所述单糖选自葡萄糖和果糖中的一种或多种；所述寡糖选自麦芽二糖和麦芽三糖中的一种或多种。