[发明专利]一种解淀粉芽胞杆菌WH3及制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及属于免疫学领域，更具体地是涉及一种解淀粉芽胞杆菌WH3菌株，同时还涉及一种解淀粉芽胞杆菌WH3菌株的制备方法，还涉及一种解淀粉芽胞杆菌WH3菌株在制备免疫佐剂中的应用，同时也适用于其它微生物产生的具有类似结构的环肽。

背景技术

免疫佐剂是指与抗原同时或预先应用，能增强抗原物质免疫原性，增强机体针对抗原的免疫应答能力，或改变免疫反应类型，而本身并无抗原性的物质。

佐剂的作用机制极为复杂，目前的研究认为主要有：(1)抗原贮存作用，矿物胶体、乳胶类佐剂等可在注射部位形成抗原储池，使抗原免受肝脏清除并延缓其释放速率，以便于疫苗抗原能充分地、高水平地、长时间地与免疫细胞接触作用，进而诱导有意义的免疫应答；(2)抗原提呈作用，佐剂能够保持抗原构象完整并将其提呈给适当的免疫效应细胞，同时影响抗原提呈细胞(APC)摄取抗原和分泌细胞因子；(3)免疫调节作用，佐剂可以调节细胞因子网络，不同的佐剂诱导APC分泌不同的细胞因子；(4)靶向作用，佐剂通过激发APC摄取和传递抗原，进而向免疫细胞呈递抗原；(5)诱导T细胞免疫应答，指有目的地使用具有抗原或T细胞表位的佐剂类物质，此物质所具有的优先诱导或仅诱导T细胞应答的特性。

佐剂的种类丰富，因此分类的方式也很多，没有统一的标准。根据其来源分为：微生物来源佐剂、天然药物佐剂、生理性产物佐剂、合成佐剂和营养物质。根据其物理和化学性质，可以把佐剂分为凝胶型佐剂、微粒型佐剂、微生物来源佐剂、乳剂和合成佐剂。根据佐剂作用方式则可分为免疫调节剂、运输型佐剂和靶向型佐剂。按照其性能差别，又可分为免疫刺激型佐剂、颗粒型佐剂、粘膜佐剂和治疗性疫苗佐剂。

伴随着生物科学的快速发展，免疫佐剂的应用范围不断扩大，免疫效果也逐渐提高，但它们依然有着各种不可避免的缺点。这些缺陷主要体现为：(1)毒副作用突出，如弗氏佐剂、Quil A等；(2)对于抗原的应用范围有限，如铝佐剂；(3)免疫作用机制单一，如铝佐剂不能诱导产生Th1型反应；(4)稳定性不高、制作工艺复杂，如CpG寡核苷酸片段、脂质体等；(5)免疫作用机制研究不彻底，如绝大多数的中药佐剂。这些缺点限制了佐剂的广泛应用，也影响着佐剂整体的发展。

理想疫苗佐剂需要具有安全、有效、靶向和经济的特点。开发研制新型的免疫佐剂以增强疫苗的免疫效力并减少疫苗的毒副作用将是未来的发展趋势，新型疫苗佐剂是研究其免疫佐剂性与毒性的最佳平衡。它是生物反应调节剂中的免疫调节剂，非特异性免疫刺激作用是发挥其免疫佐剂性，使机体产生保护性免疫应答所必需的基本条件，但如果这种作用过度或过强，则必然呈现毒副作用。因此，如果能寻找一种既具有强佐剂活性，又具有极低非特异性免疫刺激作用的物质，那么对于佐剂研究来说将具有重要意义。

发明内容

为解决现有疫苗佐剂在安全性、稳定性等方面的缺陷，本发明通过大量实验和创造性劳动，目的是在于提供了一种解淀粉芽胞杆菌WH3菌株，该菌株可通过发酵生产一种环肽用于制备免疫佐剂，制备的新型免疫佐剂具有高效性、多能性、良好的安全性、低成本、性质稳定、使用方便等优点，能激发有效的体液和细胞免疫应答。

本发明的另一个目的是在于提供了一种解淀粉芽胞杆菌WH3菌株的制备方法，该菌株是从油菜苗中分离得到具有抗真菌活性的植物内生菌，可产生抗真菌活性的环状多肽表面活性素，命名为赛弗诺(Safenour)。WH3经抗真菌活性检测、形态观察、生理生化试验鉴定和16S rDNA序列分析，鉴定为解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefacien)。解淀粉芽孢杆菌是革兰氏阳性芽孢杆菌属，在食品、医药、工农业生产中广泛应用，被认为无毒素和无致病性。WH3菌株产生的含碱性氨基酸精氨酸的Safenour多肽，具有非常显著的免疫佐剂活性。