[发明专利]一种基于细胞学动态信息集成鉴别道地中药材的方法

权利要求书

1.一种基于细胞学动态信息集成鉴别道地中药材的方法，其特征在于，包括下述步骤：

(1)中药材提取

取中药材，烘干，打粉，加蒸馏水溶解，浸泡30min，以频率42KHz超声10min，沸水浴加热20min，10000转/分离心分离10min，取上清液备用；

(2)常规细胞培养

细胞培养基：选用1640培养基、DMEM/高糖、DMEM/低糖、MEM培养基、IMDM培养基、DMEM/F12培养基、或McCoy’s 5A培养基中的一种；

胎牛血清、0.25％胰酶、PBS，其中PBS的制备是：按质量比例取Nacl 8份，Kcl 0.2份，KH₂PO₄ 0.24份，Na₂HPO₄·12H₂O 3.58份，加蒸馏水1000份，并调节pH至7.4，在121℃高温下灭菌30min后可使用；

细胞培养液配方：细胞培养基加10％胎牛血清；

选用贴壁细胞为细胞株，于37℃、5％CO₂的细胞培养箱中培养，待细胞长到密度为80％～90％，吸去培养液，加PBS润洗1～2次，再用0.25％胰酶消化细胞，直至细胞鼓起、加入细胞培养液终止消化，用细胞培养液将细胞稀释成浓度10⁴～10⁵个/ml，待用；

(3)种板

测基线：取16孔或96孔检测板，每孔加入细胞培养基，通过检测板底部连接的电子传感器，检测孔底部排列的微电极阵列的阻抗；当没有细胞时，检测孔底部排列的微电极阵列的阻抗分布均匀；

接种细胞：将上述步骤(2)中用细胞培养液稀释好的细胞加到检测板中，细胞密度为10³～10⁴个/孔；

(4)细胞动态学检测

接种细胞在检测板上的贴壁、生长，同时检测板底部连接的电子传感器测量其阻抗；阻抗的大小用细胞指数进行衡量，检测数据以时间为横坐标，以细胞指数为纵坐标制得动态曲线图；

(5)给药

待细胞长到接种后18～24小时，细胞已贴壁，将每孔的细胞培养基吸出，换成无血清培养基，培养2小时，进行给药；

将步骤(1)中备用的上清液，往检测板上孔中进行给药；同时有对照孔中加灭菌的蒸馏水，并继续进行细胞动态学检测；

(6)数据分析

将给药前的最后一个时间点测得的细胞指数为基准，对上述步骤(5)中加了上清液和对照孔中的细胞继续进行动态学检测，分别测得各自的阻抗值，通过所得阻抗值的对比即可得知待测中药材的性质。