[发明专利]一种检测猪博卡病毒(PBoV)的LAMP试剂盒及其制备方法无效
| 申请号： | 201110223258.4 | 申请日： | 2011-08-04 |
| 公开（公告）号： | CN102912033A | 公开（公告）日： | 2013-02-06 |
| 发明（设计）人： | 李帅伟;付仁一 | 申请（专利权）人： | 广州格拉姆生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 510000 广东省广州市萝岗*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 猪博卡 病毒 pbov lamp 试剂盒 及其 制备 方法 | ||
1.一种检测猪博卡病毒(PBoV)的LAMP试剂盒，其特征在于，其包含用无菌双蒸水配制的LAMP反应试剂，每个反应加入24μL LAMP反应试剂，其中LAMP反应液24μL包含的组分及浓度分别为：10U的BstDNA聚合酶，2.5μL的聚合酶缓冲液，150mmol的MgSO4，25mmol的甜菜碱，30mmol的dNTP，5pmol的引物P1，5pmol的引物P2，40pmol的引物P3，40pmol的引物P4，其中各引物序列分别为：
P1：CCAATCTGGCCAAGAGCAT，
P2：CGGCAACAGCATAGAGTCC，
P3：CCACACGATCAGCTTGGCCGGCTATACGGCTGCGTGAAC，
P4：TGGGAAGAAGCGCTGATGCAC-TCGGTCGATCCTGAACTCG。
2.根据权利要求1所述的检测猪博卡病毒(PBoV)的LAMP试剂盒，其特征在于，所述聚合酶缓冲液由以下组分制成：pH 8.8的200mM Tris-HCl，100mM KCl，100mM(NH4)2SO4，以及1％Triton X-100。
3.一种检测猪博卡病毒(PBoV)的LAMP试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)从NCBI数据库Genbank中查找PBoV序列，运用序列比对软件DNAstar进行同源性分析，获得PBoV的保守靶序列；
2)根据步骤1)获得的序列运用PrimerExplore V4在线引物设计软件进行引物设计，选取保守序列区作为构建试剂盒所使用引物，引物序列分别为：
P1：CCAATCTGGCCAAGAGCAT，
P2：CGGCAACAGCATAGAGTCC，
P3：CCACACGATCAGCTTGGCCGGCTATACGGCTGCGTGAAC，
P4：TGGGAAGAAGCGCTGATGCAC-TCGGTCGATCCTGAACTCG；
3)将步骤2)所设计的引物进行合成，运用无菌双蒸水配制LAMP反应试剂，其中LAMP反应液24μL包含的组分及浓度分别为：10U的BstDNA聚合酶，2.5μL的聚合酶缓冲液，150mmol的MgSO4，25mmol的甜菜碱，30mmol的dNTP，5pmol的引物P1，5pmol的引物P2，40pmol的引物P3，以及40pmol的引物P4。
4.一种检测猪博卡病毒(PBoV)的LAMP试剂盒的制备方法，其特征在于，所述聚合酶缓冲液由以下组分制成：pH 8.8的200mM Tris-HCl，100mMKCl，100mM(NH4)2SO4，以及1％Triton X-100。
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