[发明专利]复合载体的多环芳烃降解菌剂及其制备方法

权利要求书

1.复合载体的多环芳烃降解菌剂，其特征是：由Mycobacterium vanbaalenii.PYR-1菌悬液和载体组成，所述Mycobacterium vanbaalenii.PYR-1菌悬液与载体的体积/质量比为：每20～50ml的Mycobacterium vanbaalenii.PYR-1菌悬液中加入15g的载体；

所述每ml的Mycobacterium vanbaalenii.PYR-1菌悬液中含有5.0～6.0*10⁸CFU的Mycobacterium vanbaalenii.PYR-1菌体；所述载体由黑炭和腐殖质组成，所述黑炭和腐殖质的质量比为1.8～2.2∶1。

2.根据权利要求1所述的复合载体的多环芳烃降解菌剂，其特征是：所述腐殖质为森林土壤剖面的O层。

3.如权利要求1或2所述的复合载体的多环芳烃降解菌剂的制备方法，其特征是包括如下步骤：

1)、菌悬液的制备：

利用Mycobacterium vanbaalenii.PYR-1的单菌落制备Mycobacterium vanbaalenii.PYR-1菌悬液，所述每ml的Mycobacterium vanbaalenii.PYR-1菌悬液中含有5.0～6.0*10⁸CFU的Mycobacterium vanbaalenii.PYR-1菌体；

2)、载体原料的准备：

黑炭用0.005～0.015mol/L的HCL调节至中性，干燥；

腐殖质用0.005～0.01mol/L的NaOH调节至中性，干燥；

3)、将步骤2)所得的黑炭和步骤2)所得的腐殖质按照1.8～2.2∶1的质量比混合后，得载体；

先将所述载体灭菌，然后加入步骤1)所得的Mycobacterium vanbaalenii.PYR-1菌悬液，每15g的载体中加入20～50ml的Mycobacterium vanbaalenii.PYR-1菌悬液，再加入30～50ml的无菌水；均匀混合后冷冻干燥，得复合载体的多环芳烃降解菌剂。

4.根据权利要求3所述的复合载体的多环芳烃降解菌剂的制备方法，其特征是：所述步骤1)为：

挑取Mycobacterium vanbaalenii.PYR-1的单菌落接种于装有LB培养基的三角瓶中，于30℃，120rpm避光水浴振荡培养22～26小时；然后调节至每ml的Mycobacterium vanbaalenii.PYR-1菌悬液中含有5.0～6.0*10⁸CFU的Mycobacterium vanbaalenii.PYR-1菌体。

5.根据权利要求4所述的复合载体的多环芳烃降解菌剂的制备方法，其特征是：所述步骤3)中的冷冻干燥为：于-56～-50℃干燥6～8h。

6.根据权利要求5所述的复合载体的多环芳烃降解菌剂的制备方法，其特征是：所述LB培养液的制备方法如下：在每升水中加入酵母提取物5g、蛋白胨10g和Nacl 5g，然后用NaOH调PH 7.4～7.6。

7.根据权利要求6所述的复合载体的多环芳烃降解菌剂的制备方法，其特征是：将步骤2)所得的黑炭和步骤2)所得的腐殖质按照2∶1的质量比混合后，得载体。