[发明专利]荷叶离褶伞菌丝体中试发酵工艺

说明书

技术领域

本发明涉及一种食用菌菌丝体工厂化发酵生产工艺。

背景技术

荷叶离褶伞Lyophyllum decastes(Fr.)Singer是一种珍稀野生食用菌，分布在甘肃祁连山国家级自然保护区海拔2300-3200m的金露梅potenlilla fruticosa 灌木丛和青海云杉林地中；经测定，荷叶离褶伞菌丝体中必需氨基酸是氨基酸总量的35.3％，高于香菇和金针菇(参见菌物学报，席亚丽等2010)；化学评分为73.4，高于子实体和金针菇；氨基酸比值系数分分别是荷叶离褶伞子实体、香菇和金针菇的1.18、1.59、和1.23倍，说明菌丝体中蛋白质的均衡性优于子实体、金针菇和香菇，营养价值比子实体高，极具生产和食用价值。如何规模化发酵生产荷叶离褶伞菌丝体，开发荷叶离褶伞菌丝体，是一项急迫而有价值的工作。

发明内容

鉴于上述，本发明的目的是提供一种荷叶离褶伞菌丝体中试发酵工艺，既在中试条件下生产荷叶离褶伞菌丝体，为工厂化生产提供依据。对培养基配方和培养条件进行了优化，对发酵周期进行了测定。

本发明的目的是通过以下措施来达到：

一种荷叶离褶伞菌丝体中试发酵工艺，其步骤是

a.供试菌种

荷叶离褶伞菌种由河西学院食用菌研究所提供，菌种保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，菌种保藏号CGMCC No.1518，菌株号ZY48-1，专利号：ZL200510096405.0

b.液体菌种培养基的制备

将玉米面加水调制成悬液，加入0.1％淀粉酶，于70℃水浴锅中酶解5h；大豆先用水浸泡24h，用豆浆机打浆，加入0.1％蛋白酶，于55℃水浴锅中酶解5h；麸皮加水调制成悬液，加入0.1％蛋白酶，于55℃水浴锅中水解5h，然后用300目筛过滤，滤液中加入白糖，加水定容；

c.液体菌种培养

将供试试管菌种置于22℃恒温箱内活化24h，接入100mL/250mL三角瓶中，置于22℃、转速120r/min的恒温摇床上，连续培养7d，将该菌种接入20L液体菌种培养罐中，接种量10％，恒温22℃、通气量20L/h，连续培养7d获得液体菌种；

d.荷叶离褶伞菌丝生产

将上述玉米面、大豆、麸皮的水解过滤液加入200L发酵罐，加水定容至150L，然后加入ZnSO₄、MgSO₄、KH₂PO₄和PPE聚醚消泡剂，121℃灭菌1h，冷却至25℃，接入10％的液体菌种，搅拌，转速为160r/min、罐压0.2MPa、通气量80L/h、pH 6.5、温度20℃的培养条件，连续培养，于接菌后第2天开始，每天测定菌丝体菌丝体生物量(g/L)和胞外多糖产量(g/L)，直第8d。

本发明的优点和产生的有效效果是：

菌丝体发酵生产所需原料以农产品玉米和大豆为主，具有来源广泛，价格低廉，取材容易，安全可靠之优点；发酵条件易于满足；发酵技术易于掌握；本工艺使空气搅拌和机械搅拌相结合，使用的菌种和本发明技术方案相结合；缩短了发酵周期，提高了生产效率；可满足工厂化生产的需要。发酵至第8d菌丝体生物量可达10.578g/L，第9d胞外多糖产量可达1.212g/L。

附图说明：

图1为本发明培养时间对荷叶离褶伞菌丝体生物量及粗多糖产量的影响。

具体实施方式

本发明使用的仪器与试剂

淀粉酶、中性蛋白酶(北京奥博星生物技术有限公司)；PPE聚醚消泡剂(杭州肯明精细化工有限公司)；旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂，型号：RE52CS-1)；冷冻干燥机(北京松源华兴科技发展有限公司，型号：LGJ-18)；恒温摇床(上海智城分析仪器有限公司，型号：ZHWY-200B)；20L、200L发酵罐(北京中蕈农业发展有限公司)。

荷叶离褶伞菌丝体发酵条件优化