[发明专利]一种获得RPGR 基因新的转录剪切形式的方法

权利要求书

1.一种获得RPGR基因新的转录剪切形式的方法，其特征在于包含以下步骤：

(1)从犬类组织中提取出核糖核酸；

(2)设计特定的寡脱氧核糖核酸引物SEQ ID No.1和SEQ ID No.2；

(3)用逆转录-聚合酶链式反应扩增出cDNA片段，；

(4)应用克隆载体将扩增的cDNA片段克隆至大肠杆菌中，获得重组克隆菌落，

(5)收集重组克隆菌落中的菌体，置于裂解液中，经过裂解反应后，进行琼脂糖凝胶电泳中；检验后筛选出所有带有cDNA片段的克隆菌落；

(6)对筛选出的克隆中的cDNA片段进行顺序分析，通过与RPGR基因现有转录剪切形式比对，最终获得一种RPGR基因新的转录剪切形式：即第五至第十一个外显子缺失，第四外显子与第十二外显子直接相连；基因仍保留原有的译读框架。

2.根据权利要求1所述的获得RPGR基因新的转录剪切形式的方法，其特征在于所述的逆转录-聚合酶链式反应的反应体系为：

3.根据权利要求1所述的获得RPGR基因新的转录剪切形式的方法，其特征在于所述的逆转录-聚合酶链式反应的反应程序为：45℃，40～50分钟；92-95℃，1.5-2.5分钟；93-95℃，30-45秒钟，55-60℃，1.5-2.5分钟，65-67℃，1.5-2.5分钟，共45～55个循环；62-67℃，8-10分钟；4℃，反应结束。

4.根据权利要求1所述的获得RPGR基因新的转录剪切形式的方法，其特征在于所述的裂解液配方为：蔗糖100毫克/毫升，氢氧化钠100mM，SDS 0.1％(V/V)，核糖核酸酶A 10微克/毫升。