[发明专利]检测红霉素的磁颗粒化学发光试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种直接化学发光检测试剂盒及其检测方法。特别是检测动物组织、蜂蜜、牛奶等样本中红霉素药物残留的磁颗粒竞争直接化学发光检测试剂盒。

技术背景

红霉素类化合物属大环内酯类抗生素，主要用于抗畜禽细菌及支原体感染，亦可作猪的饲料添加剂仪促进增重和提高饲料转换率。但是红霉素类化合物能对机体产生一些副作用，如胃肠道反应、胆汁郁积性黄疸以及静滴时引起静脉炎等，还能引起坏死性肝病、精神障碍和关节炎综合症等；因此，红霉素类化合物在畜禽生产上的大量应用会导致其在畜禽产品中残留，危害公众健康。目前农业部第235号文件已规定，该药物的最高残留限量为200已规定，该。

目前，常用的红霉素的检测方法有高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱法(GC-MS)、液相色谱-质谱法(LC-MS)和酶联免疫吸附法(ELISA)等方法。

1、高效液相色谱法(HPLC)具有检测精度高、假阳性率低的特点，检测克伦特罗残留的最低检测限为1～15ug/Kg。HPLC法的主要缺点是仪器价格昂贵，操作比较繁琐，耗时长，检测费用昂贵，对检测人员专业要求较高，样本前处理较复杂。

2、气相色谱-质谱法(GC-MS)灵敏度很高，假阳性率低。该方法的主要缺点是样品需要衍生化这样复杂的前期处理。虽然经过衍生化处理的样品能在质谱中给出更多的结构信息，但是衍生化会产生多个不同的产物并导致样品的部分丢失，造成实验结果的偏差。

3、液相色谱-质谱法(LC-MS)，样品不需要衍生化处理，可对尿液、血液、肝脏、毛发和眼球样品进行检测。LC-MS/MS联用，可进一步提高信噪比，所以可用于对阳性结果的确认手段。但是，无论LC-MS还是LC-MS/MS，仪器检测法与GC-MS一样，并未能解决仪器造价昂贵，操作步骤繁琐，样本前处理复杂，对操作人员专业素养要求高等问题。

4、酶联免疫法(ELISA)是20世纪70年代出现，用于微量物质的检测，最早应用于传染病、肿瘤标志物、激素水平等临床检测，90年代开始在我国食品安全检测领域推广应用，目前依托ELISA技术的试剂盒、试纸条已经成为食品安全快速检测领域的主导产品，同时也是我公司研发和销售的主要产品类型。酶联免疫检测法基于抗原-抗体的特异性反应，检测灵敏度较高、特异性较好，技术操作简易，容易掌握，确实解决了大量的以前难以解决的许多微量小分子物质如抗生素、激素、农药残留等的定性、定量分析工作，对食品安全快速检测技术的发展起到了积极的促进作用。但是，ELISA方法存在许多自身无法克服的缺陷，主要表现在：

1)非均相反应：检测过程中为分离游离物与结合物，需要多步洗板过程，耗时费力，难以提高操作的自动化程度。

2)酶催化反应：借助酶催化底物显色，测定反应液吸光度值。反应的时间与温度对酶活力存在较大影响，试剂稳定性差。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种红霉素类药物的化学发光试剂盒，采用该试剂盒进行红霉素类药物的检测时不仅具备较高的灵敏度，特异性，而且具有较高的反应速度。

本发明的另一个目的在于提供一种红霉素类药物的测试方法，该方法操作简单，灵敏度高，特异性好。

实现上述目的，本发明提供一种红霉素类药物检测试剂盒，其包含的主要试剂有：发光标记物、荧光素标记物、标准品、质控品、分离试剂。

所述的分离试剂是包被有羊抗FITC抗体的顺磁性纳米微珠。

所述的顺磁性纳米微珠，表面含有-OH、-COOH或-NH₂活性基团的微珠，用于包被羊抗FITC单克隆抗体，其内芯是Fe₃O₄或γ-Fe₂O₃，使得微珠具有顺磁性。

所述的发光标记物是异鲁米诺衍生物标记的红霉素类药物半抗原。所述的异鲁米诺衍生物是ABEI、AHEI或ABEN。

所述的试剂盒还包括标准品，质控品和浓缩洗液。

所述的荧光素标记物是FITC标记红霉素类药物单克隆抗体。

本发明还提供一种利用试剂盒检测红霉素类药物的方法，包括下列步骤：

1)分别吸取20μl-100μl标准品或样本，然后加入20μl-100μl发光标记物，再加20μl-100μl荧光素标记物，充分混匀后，37℃温育15min；

2)加入包被有羊抗FITC单克隆抗体的顺磁性纳米微珠80-150μl，混匀后在37℃温育5min；