[发明专利]抗肿瘤多肽及其制备方法和抗肿瘤应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术制药领域的多肽类药物，及其制备方法和抗肿瘤应用。

背景技术

肿瘤是一种多基因、多因素疾病，传统的肿瘤治疗包括手术、化疗、放疗等，主要直接以肿瘤细胞为靶点，存在术后残留，药物传递和穿透性问题，及对化疗、放疗不敏感、耐药等缺点。而肿瘤的生长是血管依赖性的，当肿瘤直径≤2mm时，肿瘤细胞间通过弥散作用吸取营养，称为“血管前期”；当肿瘤进一步增大时，则需新生毛细血管来提供营养，称为“血管期”。血管新生对肿瘤的发生、发展和转移密切相关，因此，20世纪70年代初Folkman提出肿瘤抗血管疗法，这一设想为越来越多的证据所支持，并使这一领域成为肿瘤研究的热点及肿瘤治疗的新策略。在多种血管生成抑制剂当中，内皮抑素(endostatin)是目前作用最强、实验效果最好的肿瘤血管生成抑制剂。

内皮抑素是一种血管生成抑制因子，为20kd分子量蛋白质，由胶原蛋白XVIII的羧基末端的184个氨基酸残基组成。能特异性的抑制内皮细胞的增殖和血管的生成，抑制肿瘤的形成和转移。它的结构中有一个由11个精氨酸组成的碱性区域，这一区域对肝素有较强的亲和力，可能是发挥对血管内皮细胞抑制作用的关键结构区域。内皮抑素的分子结构揭示是一个高度折叠的分子构象，而内皮抑素N末端的无规则卷曲结构提示：它的功能活性区可能最小化在N端的这几十个氨基酸中。1、3、11位的组氨酸和76位的天门冬氨酸构成了锌离子结合域，能够1∶1结合锌离子，在抗肿瘤效应中发挥重要作用。

血管的生成依赖原有的血管牙扩展，内皮细胞必须相互粘附并与细胞外间质(ECM)粘附以形成新生微血管。在这个过程中，整合素起着重要的作用，它参与内皮细胞的迁移和毛细血管样管道的形成。RGD序列是与肿瘤细胞粘连有关的ECM受体中主要粘附识别的氨基酸序列-Arg-Gly-Asp(精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸，简称RGD)，人们合成了许多RGD多肽及衍生物，从而竞争、干扰肿瘤细胞与ECM的相互作用，达到抑制肿瘤转移的目的。实验表明含RGD重复序列多肽，在体外能明显抑制黑色素瘤细胞的侵袭、迁移，在体内抑制黑色素瘤的自发性和实验性肺转移的形成，作用较非重复的RGD肽强，而且这种增强作用与RGD序列的重复次数有关，重复次数越多，抗肿瘤转移作用越强。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有抗肿瘤功能的多肽及其制备方法，本发明的多肽，其结构包括内皮抑素N端锌离子结合位点的3个组氨酸，一个β折叠结构，及串联的RGD序列。

其中所述：内皮抑素N端锌离子结合位点的3个组氨酸位点基本序列为SEQ ID NO：1序列，其中Asp与Leu之间为3～8个氨基酸，优选为4～6个，其特征在于倒数第二位为Pro，其他为Ala、Phe、Trp、Gly、Ile、Leu、Val、Gln。

其中所述：β折叠结构主要序列为SEQ ID NO：2序列，在Asn后为5～20个氨基酸，优选为6～10个，其特征在于第二位为Pro，并含有一个Gly，其他为Ala、Ser、Met、Leu、Gly、Asn、Gln、Thr、Tyr。

其中所述：串联的RGD结构基本序列为SEQ ID NO：3序列串联数为0～5个，优选为0～3个。

本发明优选的多肽序列如下：

多肽序列1：His Ser His Arg Asp Phe Gln Pro Val Leu His Leu Val Ala Leu Asn Ser Pro Leu Ser Gly Gly Met，见SEQ ID NO：4。

多肽序列2：His Ser His Arg Asp Phe Gln Pro Val Leu His Leu Val Ala Leu Asn Ser Pro Leu Ser Gly Gly Met Arg Gly Asp，见SEQ ID NO：5，

多肽序列3：His Ser His Arg Asp Trp Gln Pro Val Leu His Leu Val Ala Leu Asn Ser Pro Leu Ser Gly Gly Met Arg Gly Asp Arg Gly Asp Arg Gly Asp，见SEQ ID NO：6。